細胞傳代培養常見問題匯總
一般拿到細胞后,應該注意什么?
收到細胞先不開蓋,用酒精將整個細胞瓶外壁進行消毒,放在培養箱靜置若干小時后(看細胞密度而定)在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數拍照(建議收細胞時的培養基拍一張照片,觀察培養基的顏色和是否有漏液情況,顯微鏡下拍細胞100X,200X各兩張),排除細胞本身污染的情況。
何時須更換培養基?
視細胞生長密度而定,常規細胞2-3天更換培養基。
細胞何時進行傳代較好?
一般情況下細胞生長至完全匯合后就應該傳代,所有細胞生長都有一個要求不宜生長過密(也就是常說的長老了),但有接觸抑制的細胞,在匯合前就必須進行傳代,這類細胞一般在密度70-80%就進行傳代,否則會引起細胞分化。 全自動細胞計數儀只能用來計數嗎?廣東應用細胞計數儀哪家便宜
貼壁細胞傳代如何使用胰酶?
一般使用trypsin-EDTA濃度為0.25% trypsin-0.53 mM EDTA.2Na或0.05%trypsin-0.02 mM EDTA.2Na。消化液濃度過高時,易造成培養基中細胞碎片增多,黑渣子增多,常規細胞傳代時建議用0.05%的胰酶進行消化,對于難消化的細胞可采用0.25%胰酶進行消化,細胞密度過高超過80%時,采用分步消化法。胰酶儲存在–20°C,解凍在4°C進行,開瓶后應立即少量分裝于無菌試管中,保存于–20°C,避免反復冷凍解凍造成trypsin之活性降低,并可減少污染之機會。 蘇州通用細胞計數儀細胞計數儀的體積有多大?
如何獲取高質量的細胞懸液,下面就帶您一步步***從組織到細胞懸液的旅程,讓細胞懸液制備不再成為困擾您的難題。
樣本準備
新鮮組織樣本是制備細胞懸液的首要條件,新鮮組織從***取下后,去除周圍的脂肪、結締組織或者壞死組織,用預冷的PBS或者生理鹽水沖洗干凈,快速轉移到解離實驗室進行細胞懸液制備,一般1個黃豆大小的組織量(200 mg)即可滿足一次組織解離。如果收集到新鮮樣本后無法立即進行懸液制備,可暫時用組織保存液4℃保存,盡快完成細胞懸液制備。
細胞內有空泡,是否是正?,F象?
部分細胞本身存在一定的空泡(如HepG2,Ishikawa及一些耐藥株等),這個是正?,F象。如果只有少數細胞有內出現極少空泡,則很可能是細胞狀態不佳,可以通過調整血清濃度,控制消化,控制傳代比例及時間等方法來調整細胞狀態;如果大部分細胞出現空泡,且單個細胞內空泡數目偏多,則可能細胞代次較高,細胞老化所致,需更換代次較早的細胞。
細胞傳兩代后開始逐漸死亡的原因
很可能是培養體系不適合細胞(未使用推薦的培養體系);或者消化過度,對細胞有嚴重影響;或者是傳代比例不合適(具有密度依賴性的細胞,傳代太稀;或者生長較快的細胞,傳代較密,細胞嚴重堆疊生長)。 TANK全自動細胞計數儀價格。
傳統手動計數法
回答這個問題前,我們拿一個可以比較的對象,即原始的細胞計數及活率分析方法——1臺光學顯微鏡+血球計數板,待測的細胞懸液樣品被滴加在血球計數板上,通過肉眼人工計數統計細胞數量和計算細胞活率。
顯微鏡下我們可以看到血球計數板上4個區域,其中的活細胞和死細胞數目被分別統計。這個方法比較大的優勢是整套設備很便宜,配套一塊血球計數板,以及自配的臺盼藍溶液即可開始整個實驗,所以使用成本會很低,比較適合高校研究所中用于學生的教學實驗。 全自動細胞計數儀怎么選擇?重慶自動化細胞計數儀銷售電話
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實驗中儀器之間數據的一致性
對于生物制藥公司的工藝開發和生產質控部門,一般會選擇使用相同的分析儀器,這樣采用相同的分析方法,可以保持上下游測試條件的一致性。另外,不同地區的生產車間要保持生產質量的一致性,很多時候也會使用同型號的分析儀器,但所使用儀器之間檢測結果的可比性就成了一個考察因素,并且檢測過程中人工操作的影響越小越好,以減少人為操作帶來的誤差。
這樣得到的生物藥質量才可以有保證,這也是為何GMP和FDA等法規會有這方面的要求。所以,對于生產質控部門采購細胞活率分析儀,這點就特別需要考慮。 廣東應用細胞計數儀哪家便宜
上海拓開生物科技有限公司總部位于奉金路469號4幢3層1296室,是一家從事生物科技領域、化工科技領域內的技術開發、技術服務、技術咨詢、技術轉讓,辦公用品、儀器儀表、化工原料及產品(除危險化學品、監控化學品、煙花爆竹、易制毒化學品)批發零售。 【依法須經批準的項目,經相關部門批準后方可開展經營活動】的公司。公司自創立以來,投身于葡萄糖乳酸分析儀,生化分析儀,智能控制系統,細胞計數儀,是電子元器件的主力軍。上海拓開始終以本分踏實的精神和必勝的信念,影響并帶動團隊取得成功。上海拓開始終關注自身,在風云變化的時代,對自身的建設毫不懈怠,高度的專注與執著使上海拓開在行業的從容而自信。