單細胞測序實驗的第一步是單細胞懸液的制備，而懸液制備中細胞計數的準確性直接影響單細胞測序的數據質量，但是關于細胞計數您真的了解嗎？
目前細胞計數主要使用臺盼藍染色法和雙熒光AO/PI染色法。
1）臺盼藍染色原理：臺盼藍不能透過活細胞正常完整的細胞膜，故活細胞不著色。而死細胞的細胞膜透性增高，可使染料進入細胞內而使細胞著色（藍色）。
2）雙熒光AO/PI染色原理：吖啶橙（AO）可以通過完整的細胞膜，嵌入所有細胞（活細胞和死細胞）的細胞核，呈現綠色熒光；碘化丙啶（PI）只能通過不完整的細胞膜，即死細胞的細胞膜，嵌入所有死細胞的細胞核，呈現紅色熒光。
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染色法鑒定機理
染色法分化學染色法和熒光染色法，根據染色機理的不同，染料或使死細胞著色，或使活細胞著色。死活細胞在生理機能和性質上的差異主要包括：
死活細胞細胞膜通透性的差異：
活細胞的細胞膜是一種選擇性膜，對細胞起保護和屏障作用，只允許物質選擇性的通過；而細胞死亡之后，細胞膜受損，通透性增加。常用的以臺盼藍鑒別細胞死活的方法就是利用了這一性質。
臺盼藍，又稱錐藍，是一種陰離子型染料，不能透過完整的細胞膜。所以經臺盼藍染色后只能使死細胞著色，而活細胞不被著色 廣東優勢細胞計數儀定制價格全自動細胞計數儀的對比數據。
一般拿到細胞后，應該注意什么？
收到細胞先不開蓋,用酒精將整個細胞瓶外壁進行消毒，放在培養箱靜置若干小時后（看細胞密度而定）在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數拍照（建議收細胞時的培養基拍一張照片，觀察培養基的顏色和是否有漏液情況，顯微鏡下拍細胞100X，200X各兩張），排除細胞本身污染的情況。
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細胞傳代培養常見問題匯總
貼壁細胞如何進行傳代?
去掉原T25培養瓶里面的培養基，T25瓶加3-4mlPBS洗1-2次;棄PBS，再加1.5ml的Trypsin-EDTA(1X)消化液消化細胞，顯微鏡下觀察，待細胞變圓，細胞間隙明顯，部分細胞剛開始脫離瓶壁，加4ml左右完全培養液混勻終止消化，將細胞小心吹打下來，1000rpm/min室溫離心5min;棄上清，細胞沉淀用完全培養液重懸，按要求分瓶(視細胞密度而定1:2-1:3，1:3-1:6，1:6-1:8)，每T25瓶補足培養基至5-6ml，37℃、5%CO2孵箱培養。 全自動細胞計數儀的缺點。
培養細胞時應使用5%或10%CO2?
一般培養基中大都使用HCO3 - / CO32- / H+作為pH的緩沖系統，而培養基中NaHCO3的含量將決定細胞培養時應使用的CO2濃度。當培養基中NaHCO3含量為每公升3.7g時，細胞培養時應使用10%CO2;當培養基中NaHCO3為每公升1.5g時，則應使用5%CO2培養細胞。
CO2培養箱之水盤如何保持清潔?
定期(每周一次)更換水盤里面的水，水盤的水必須使用無菌蒸餾水或無菌去離子，水盤中可添加1%硫酸銅以預防霉菌污染。
希望能幫到大家。
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根據臺盼藍原理開發的全自動細胞計數儀。浙江推廣細胞計數儀咨詢問價
細胞接種密度多少合適?
依照細胞株基本數據上的接種密度或稀釋分盤的比例接種即可。細胞數太少或稀釋的太多亦是造成細胞無法生長的一個重要原因。按照我們的經驗：一般倍增時間24 h內的細胞，傳代比率1:6-1:12為宜，倍增時間24-48 h的細胞，傳代比率1:3-1:8為宜，倍增時間超過48h的細胞, 傳代比率1:2-1:4為宜。
如何預防細胞培養中黑點的產生?
掌握細胞傳代的比較好時機，不要細胞長老了再傳代;掌握好消化時間，防止消化過度產生細胞碎片;減少血清等試劑的凍融次數;將培養液的PH調到比較好;嚴格控制水質和器皿的清潔。 浙江推廣細胞計數儀咨詢問價
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