細胞傳代培養常見問題匯總
一般拿到細胞后,應該注意什么?
收到細胞先不開蓋,用酒精將整個細胞瓶外壁進行消毒,放在培養箱靜置若干小時后(看細胞密度而定)在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數拍照(建議收細胞時的培養基拍一張照片,觀察培養基的顏色和是否有漏液情況,顯微鏡下拍細胞100X,200X各兩張),排除細胞本身污染的情況。
何時須更換培養基?
視細胞生長密度而定,常規細胞2-3天更換培養基。
細胞何時進行傳代較好?
一般情況下細胞生長至完全匯合后就應該傳代,所有細胞生長都有一個要求不宜生長過密(也就是常說的長老了),但有接觸抑制的細胞,在匯合前就必須進行傳代,這類細胞一般在密度70-80%就進行傳代,否則會引起細胞分化。 全自動細胞計數儀的對比數據。廣東什么是細胞計數儀定制價格
單細胞測序實驗的第一步是單細胞懸液的制備,而懸液制備中細胞計數的準確性直接影響單細胞測序的數據質量,但是關于細胞計數您真的了解嗎?
目前細胞計數主要使用臺盼藍染色法和雙熒光AO/PI染色法。
1)臺盼藍染色原理:臺盼藍不能透過活細胞正常完整的細胞膜,故活細胞不著色。而死細胞的細胞膜透性增高,可使染料進入細胞內而使細胞著色(藍色)。
2)雙熒光AO/PI染色原理:吖啶橙(AO)可以通過完整的細胞膜,嵌入所有細胞(活細胞和死細胞)的細胞核,呈現綠色熒光;碘化丙啶(PI)只能通過不完整的細胞膜,即死細胞的細胞膜,嵌入所有死細胞的細胞核,呈現紅色熒光。
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染色法鑒定機理
染色法分化學染色法和熒光染色法,根據染色機理的不同,染料或使死細胞著色,或使活細胞著色。死活細胞在生理機能和性質上的差異主要包括:
死活細胞細胞膜通透性的差異:
活細胞的細胞膜是一種選擇性膜,對細胞起保護和屏障作用,只允許物質選擇性的通過;而細胞死亡之后,細胞膜受損,通透性增加。常用的以臺盼藍鑒別細胞死活的方法就是利用了這一性質。
臺盼藍,又稱錐藍,是一種陰離子型染料,不能透過完整的細胞膜。所以經臺盼藍染色后只能使死細胞著色,而活細胞不被著色
所有和動物細胞培養相關的生物領域都需要進行細胞濃度和活率的分析,不管是大學科研院所,還是各種大小規模的生物醫藥公司,細胞計數及活率分析儀無疑已經成為了細胞培養相關領域的一個基本配套的分析儀器。
對于這樣一個基礎的分析儀器,如果我們使用關鍵詞“細胞計數及活率分析儀”,在百度上搜索可以得到巨量的結果,可以達到3450萬條相關結果。
那么在這茫茫的信息中,我們如何來選擇一款適合自己的細胞計數及活率分析儀呢?
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傳統手動計數法
回答這個問題前,我們拿一個可以比較的對象,即原始的細胞計數及活率分析方法——1臺光學顯微鏡+血球計數板,待測的細胞懸液樣品被滴加在血球計數板上,通過肉眼人工計數統計細胞數量和計算細胞活率。
顯微鏡下我們可以看到血球計數板上4個區域,其中的活細胞和死細胞數目被分別統計。這個方法比較大的優勢是整套設備很便宜,配套一塊血球計數板,以及自配的臺盼藍溶液即可開始整個實驗,所以使用成本會很低,比較適合高校研究所中用于學生的教學實驗。 根據臺盼藍原理開發的全自動細胞計數儀。河北現代細胞計數儀銷售
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實驗中測試速度和操作便捷性
在生物制藥公司工作的研發人員,每天都有忙不完的工作,如何提高她們的工作效率?特別是像細胞計數及活率分析這種比較消耗時間的工作,如何讓我們寶貴的實驗人員從這個工作中解脫出來?而基本的要求所用的細胞計數和活率分析儀,不僅測試速度要快,而且簡單易操作。對于測試速度快直接反映為檢測時間要短,另一個則是測試的時間不影響我其他的工作,可以實現不間斷連續測樣,無需實驗人員在旁操作等待。 廣東什么是細胞計數儀定制價格
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