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細胞轉染的常用方法：磷酸鈣共沉淀原理：該法可用于瞬時或穩定轉染。然而因其對pH、溫度和緩沖液鹽濃度的微小變化十分敏感，所得結果容易出現差異，且對許多類型的細胞培養物(尤其是原代細胞)具有細胞毒性，轉染效率較差。實驗步驟：將核酸與氯化鈣在磷酸鹽緩沖液中混合，同時控制好pH、溫度等條件 → 室溫孵育，生成濃縮DNA的極小不溶性顆粒沉淀 → 將顆粒型沉淀分散到細胞中，促進DNA粘附在細胞表面 → 共沉淀通過內吞作用進入胞漿 → 分析細胞瞬時基因表達或者選擇穩定性傳染。在一般實驗室中很難普及。其它物理和化學介導的轉染方法，則各有其特點。上海細胞高效轉染試劑哪里買

如何高效率實現細胞轉染：轉化、轉染、轉導幾個名詞是從事生命科學研究的初學者經常碰到的，也是讓人容易混淆的。他們之間有什么區別和聯系呢：轉化(transformation)指將質?；蚱渌庠碊NA導入處于感受態的宿主細胞（原核生物），并使宿主細胞獲得新的表型的過程。轉導(transduction)由噬菌體或細胞細菌介導的遺傳信息轉移過程稱轉導或傳染（Infection）。轉染(transfection)是指真核細胞主動或者被動導入外源DNA片段而獲得新表型的過程。對于真核生物，轉染就是原核生物中轉化的同義詞。轉染技術轉染是將外源遺傳物質導入真核細胞的過程，是細胞和分子生物學研究的重要工具。在現生命可續研究中，大部分的工作是利用基因功能研究來探索生命過程，如何將目的基因導入細胞內是科學實驗過程中不可缺少的實驗技術，而細胞轉染是完成這一過程的必需步驟。蘇州正規細胞高效轉染試劑產品介紹細胞轉染是完成這一過程的必需步驟。

細胞轉染之PEI 轉染法：1.細胞分盤：通過胰酶消化收集細胞，用適當的完全培養基以 1×105 至 4×105細胞/cm2 的密度平鋪細胞于 35 mm 培養皿上（根據實驗需要選擇培養皿，使細胞貼壁后所占面積達到培養皿總面積的 70－90％）。將細胞置于含 5％CO2 的 37℃溫箱中孵育 8-24 h，當細胞貼壁完全后即可開始轉染。轉染前 2 h 換液（用 1.5 ml 無血清培養基置換舊的培養基）。注：PEI轉染法對細胞生長有克制作用，在換液前細胞幾乎不生長，所以需要密度比較大時做轉染。2.制備PEI-DNA 混合物以 35 mm 組織培養皿用 240 μl 反應總體積為例。先在無菌EP管中加入120 μl 1×HBS,再加入質粒 DNA（總量 1-3 μg 為佳），混勻后加入等體積 PEI工作液，充分混勻后室溫靜置 20-30 min ，較后將這 240 μl 的PEI-DNA混合液逐滴加入上述單層細胞的細胞培養基中，輕輕搖動平皿混勻后置于含 5％ CO2的 37℃溫箱孵育。

細胞轉染實驗簡介實驗步驟：1、細胞傳代(1)試驗準備：200ul/1mlTip頭各一盒(以上物品均需高壓滅菌)，酒精棉球，廢液缸，試管架，微量移液器，記號筆，培養皿，離心管。(2)棄掉培養皿中的培養基，用1ml的PBS溶液洗滌兩次。(3)用Tip頭加入1mlTrypsin液，消化1分鐘(37。C，5%CO2)。用手輕拍培養瓶壁，觀察到細胞完全從壁上脫落下來為止。(4)加入1ml的含血清培養基終止反應。(5)用頭多次吹吸，使細胞完全分散開。(6)將培養液裝入離心管中，1000rpm離心5min。(7)用培養液重懸細胞，細胞計數后選擇0.8X106個細胞加入一個35mm培養皿。(8)將合適體積完全培養液加入離心管中，混勻細胞后輕輕加入培養皿中，使其均勻分布。(9)將培養皿轉入CO2培養箱中培養，第二天轉染?？梢允褂靡恍I養豐富的無血清培養基，或者在轉染培養基中使用血清。

細胞轉染那些事兒：1. 選擇傳代次數較低并處于對數生長期的細胞進行轉染。對大多數細胞而言，均需要在轉染當天或前現在鋪板，第二天上午進行轉染，48h后收集細胞進行功能檢測。對于原代細胞，可用促有絲分裂刺激物進行細胞活化。2.對于貼壁細胞，一般要求在轉染前一日，用胰酶處理為單細胞懸液，重新接種于培養皿或瓶，較好在轉染前4小時換一次新鮮培養液。3.支原體污染會嚴重降低細胞轉染的效率，且支原體不會像細菌污染那么明顯，因而轉染前可用環丙沙星處理細胞以除去支原體。4.細胞轉染時需要一定的細胞密度，以70-90%（貼壁細胞）或2×106-4×106細胞/ml（懸浮細胞）為宜。瞬時表達分析檢測未重組質粒DNA上基因的表達。徐州正規細胞高效轉染試劑廠家直銷

瞬時轉染后，可在48h-72h細胞長滿之后，提取細胞蛋白或者RNA。上海細胞高效轉染試劑哪里買

細胞轉染效率低下的幾個大坑：1. 細胞污染細胞污染也是造成細胞死亡，轉染效率低下的一大原因。首先，轉染細胞用的質粒必須保證無菌。而現在市場上的一般的質粒提取試劑盒都做不到較全無菌。毛博這里再貢獻一個獨門絕招：將提完質粒后或者提的較后一步，用75％乙醇沉淀，這樣就除菌了。2.質粒不行轉染用的質粒首先要保證數量，一般為2 μg以上。質粒純度不夠或者含有細菌LPS或其他對細胞有毒害作用的物質，也會影響轉染效率。這個時候，就應該對質粒進行純化和濃縮。上海細胞高效轉染試劑哪里買

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