鼠尾膠原膠凝程序:膠原蛋白I按以下步驟使其pH達到堿性時凝膠。1)將無菌5cm左右的紗布海綿貼在150mm培養皿的蓋子上來制備氨蒸氣室。用氫氧化銨使紗布飽和,把蓋子放在150mm的培養皿上,暫放置一邊。2)將膠原蛋白I均勻涂布在要包被物的表面上,厚度可以根據需要改變,膠原蛋白I(50-100μL)足以涂覆22mm的蓋玻片。 對于直徑100mm的培養皿,每個加入約6mL; 對于60mm培養皿添加約2.3mL,對于35mm培養皿添加約1mL。3)將涂有膠原蛋白的蓋玻片或帶有蓋子的培養皿轉移到氨蒸氣室并暴露三分鐘。4)在無菌蒸餾水中(35mm培養皿加5mL,60mm培養皿加10mL等)浸泡涂布的蓋玻片或培養皿30min。吸取原蒸餾水并加0.5-1.0mL無菌蒸餾水,放置在層流罩中過夜。5)吸出蒸餾水,用含血清的平衡鹽緩沖液溶液代替并保存在2-8°C。在冰水浴中將粉碎的鼠尾腱在醋酸溶液中溶脹。石家莊鼠尾膠原價格
鼠尾Ⅰ型膠原:組裝液的配置:1.50 mmol/L甘氨酸+200 mmol/L氯化鉀 100 mL,用1 mol/L 氫氧化鈉調節酸堿度至9.2。2.膠原纖維的重構吸取膠原10μL至小培養皿中,倒入0.5 mL自組裝液,室溫放置20 min。予自組裝液自組裝24 h。吸取0.05%戊二醛2 mL至小培養皿中,將自組裝24 h的膠原浸泡在戊二醛中。然后將膠原經去離子水、50%乙醇、100%乙醇依次漂洗后進行TEM觀察。3.生物礦化形成仿生骨材料靜滴配置鈣磷礦化液將25mL鈣液(10 mmol/L 二水氯化鈣+150 mmol/L氯化鈉+50 mmol/L三羥甲基氨基甲烷+0.02%三氮化鈉)倒入燒杯中,滴入聚丙烯(PAA)至濃度350 μg/mL;滴加1 mol/L的氯化氫,調節酸堿度至7.4,然后緩慢滴入25 mL磷液(6 mmol/L磷酸氫二鈉),約16滴/min。論鼠尾膠原能促進毛細胞貼壁,涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實驗的長時程記錄,并且制作簡便,成本低廉。太原正規鼠尾膠原廠家膠原蛋白按其應用可以分為食品級、一般級、醫藥級。
利用鼠尾Ⅰ型膠原構建與人類自體骨組織化學成分和分子結構相近的仿生骨材料。 方法 通過醋酸酸解提取鼠尾Ⅰ型膠原蛋白,并重構成膠原纖維。然后,將重構后的膠原纖維放置在礦化液中模仿骨生物礦化2~6 d,通過透射電子顯微鏡和電子衍射觀察骨生物礦化。 結果 酸解提取的鼠尾Ⅰ型膠原蛋白能夠重構成膠原纖維,并且具有特征性的D-Band結構。透射電子顯微鏡和電子衍射顯示:礦化2 d后,羥基磷灰石鈣前體滲入膠原纖維,膠原纖維部分礦化;礦化6 d后,膠原纖維內部完全礦化,形成Ⅰ型膠原蛋白/羥基磷灰石鈣的仿生骨材料。 結論 利用酸解法提取的鼠尾Ⅰ型膠原蛋白可以重構成膠原纖維,經礦化可形成與人類自體骨組織化學成分和分子結構一致的仿生骨材料。
鼠尾膠原蛋白提取、分離、純化方法的建立及鑒定:通過對鼠尾進行剝離獲得鼠尾腱,用Tris-HCl緩沖液、胃蛋白酶處理獲得鼠尾膠原蛋白原液、反復使用氯化鈉溶液進行分級鹽析、醋酸溶液復溶進行鼠尾膠原蛋白的純化.超純水透析除去無機鹽類獲得純化的鼠尾膠原蛋白。通過SDS-PAGE蛋白質電泳、氨基酸含量分析等技術手段鑒定.結果 本研究建立的方法可以獲得高純度的鼠尾膠原蛋白,純度達到電泳純.與國外進口的商業化鼠尾膠原蛋白產品相比無差異。研究了提取、分離、純化參數對得率、純度的影響,建立了較優的鼠尾膠原蛋白提取條件,胃蛋白酶用量:1∶500,酶解時間:72 h,鹽析濃度:2 mol/L,提取所用酸溶液:0.05 mol/L醋酸溶液.結論 為鼠尾膠原蛋白的擴大化生產提供了合適的工藝參數,為大量獲得鼠尾膠原蛋白并進行更深層次的功效方面研究提供了理論支持和實踐基礎。制備鼠尾膠原:按每克尾腱50ml的比例,加入0.1%醋酸溶液。
鼠尾膠原蛋白I型,用那一種膠原酶可以溶解:1.將膠原加入到0.1M 的醋酸中,制備成濃度為0.1%的溶液。在室溫中攪拌1-3小時直到完全溶解。2.建議將溶液轉移到擰口的玻璃瓶中,并小心的在瓶底鋪上一層氯仿。氯仿的量約為膠原溶液的10%。不要晃動或攪拌。在2-8度中放置過夜。在無菌條件下轉移上層的膠原溶液。我們不建議用過濾的方法無菌化。已經發現該方法會導致丟失蛋白。3.稀釋一定數量的膠原溶液。4.按照6-10ug/cm2的濃度包被培養瓶。在室溫或37度結合數小時或者2-8度過夜。5.從包被表面除去多余的液體。過夜干燥。如果膠原溶液不是無菌的,這時候可以在無菌細胞操作室中暴光在紫外線下過夜消毒。 在接種細胞前用無菌的水漂洗。將培養器皿在室溫放置20min待膠凝固后,轉移到培養箱內。昆明鼠尾膠原廠家
I型膠原蛋白分布非常普遍,是主纖維束的主要成分。石家莊鼠尾膠原價格
鼠尾膠原包被培養板:胎干細胞在體外可誘導分化為血管內皮細胞,進而形成血管,因而成為血管組織工程理想的種子細胞來源之一。目的:探討建立定向誘導人胚胎干細胞向血管內皮細胞分化的方法。方法:在小鼠胚胎成纖維細胞飼養層上培養人胚胎干細胞H1,將H1細胞團塊轉移到鼠尾膠原包被的培養板,貼壁24-48h后,培養基換為含不同輔助因子和內皮細胞生長添加劑的EGM-2內皮細胞培養基。結果與結論:①在EGM-2內皮細胞培養基誘導下,細胞逐步表達內皮細胞特異性標記基因VEGFR-2、PECAM1、vWF、CD34、VE-cadherin、GATA-2。②分化細胞表達內皮細胞特異性標記VE-cadherin、CD31。③分化細胞具有吞噬低密度脂蛋白功能。說明將人胚胎干細胞接種在鼠尾膠原包被培養板上,通過EGM-2內皮培養體系誘導,可直接分化為功能性血管內皮細胞。為研究胞外基質對誘導胚胎干細胞血管內皮細胞分化的作用以及相關信號分子機制打下了基礎。論鼠尾膠原能促進毛細胞貼壁,涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實驗的長時程記錄,并且制作簡便,成本低廉。石家莊鼠尾膠原價格