武漢鼠尾膠原生產廠家

膠原蛋白的提取方法：酸法提取：酸法提取主要采用低離子濃度酸性條件浸漬處理原料，從而破壞分子間的鹽鍵和希夫堿，而引起纖維膨脹、溶解。作為溶劑使用的酸，主要有鹽酸或亞硫酸、磷酸、硫酸、醋酸、檸檬酸和甲酸等。酸法是提取膠原蛋白比較常用和有效的方法，用酸法提取的膠原較大程度地保持了其三股螺旋結構。此法處理快速，所得產品的分子量是連續的，適用于醫用生物材料及原料的制備，但產品得率低，設備腐蝕嚴重，污染重。趙蒼碧等[2]采用0.3%的醋酸溶液在4℃下從牛腱中提取膠原蛋白，得到高純度的膠原蛋白溶液。鼠尾膠原醋酸溶解：制備成濃度為0.1%的溶液。武漢鼠尾膠原生產廠家

三維膠原的制備：鼠尾膠原蛋白I型在濃度1mg/ml以上，pH7左右時可形成具有一定強度三維膠,建議成膠濃度1-2mg/ml。膠原蛋白溶解于0.006mol/L乙酸中，在成膠過程中需要加入0.06X體積的0.1mol/LNaOH來中和。需要的溶液(均需要無菌、預冷):10xPBS(可含10mg/L的酚紅用于pH指示)或10x培養液,0.1mol/LNaOH,0.1mol/L乙酸(一般不用),雙蒸水A．不含細胞的三維膠原的制備（以配制1毫升，1mg/ml三維膠為例）：將200ul鼠尾膠原蛋白I型(5mg/ml)加到置于冰浴的離心管中，加入690ulH2O。然后加到12ul0.1mol/LNaOH中（如果反過來把12ul0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中，會由于NaOH不能迅速混勻而產生局部的膠原凝結），立即混勻。南昌正規鼠尾膠原哪里買這種膠原蛋白在37℃的條件下會形成3股螺旋結構，可以用來當作細胞培養的基質。

鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用方法及注意事項：通過醋酸抽提、氯化鈉沉淀、磷酸氫二鈉沉淀等步驟制備的。鼠尾膠原蛋白可用于包被細胞培養器皿，培養一些在普通細胞培養器皿中不易貼壁的細胞。也可用于制備三維膠，模擬真實的生長環境，使細胞在三維環境中生長。1，在使用鼠膠原蛋白型包被的細胞培養皿中檢查到PC-12細胞的貼壁和生長。1mg/ml濃度以上，pH左右時可形成具有一定強度的三維膠，檢查到NIH-3T3細胞在三維膠內正常生長、PC-12細胞在三維膠表面正常生長。使用方法：1、細胞培養器皿的表面包被推薦濃度：1-5ug/cm0.012mg/ml。按以下表格體積加到相應的培養器皿中。論鼠尾膠原能促進毛細胞貼壁，涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實驗的長時程記錄，并且制作簡便，成本低廉。

鼠尾膠原在心肌細胞氧化損傷中的保護作用：膠原蛋白具有抗氧化作用，但既往在實驗室主要將鼠尾膠原用于促進細胞貼壁和支架構建，對于其抗氧化作用目前尚無相關研究。目的：探討鼠尾膠原對過氧化氫導致離體心肌細胞氧化損傷的保護作用。方法：將原代培養的SD大鼠乳鼠心肌細胞隨機接種到鋪有鼠尾膠原的培養皿（實驗組）和普通培養皿（對照組）中，并且均用0，10，100μmol/LH2O2誘導。24h后，以電子顯微鏡觀察各組乳鼠心肌細胞的形態，應用MTT比色法檢測心肌細胞存活率，TUNEL法檢測心肌細胞凋亡形態，流式細胞技術檢測心肌細胞凋亡率，黃嘌呤氧化酶法檢測超氧化物歧化酶活力，硫代巴比妥比色法檢測丙二醛水平，Western-Blot檢測凋亡蛋白Bax、Bcl-2的表達。整個操作請在無菌環境下無菌操作，避免污染以影響細胞生長。

鼠尾膠原蛋白的提取方法：1.將黏稠的膠體溶液進行高速冷凍離心處理，收集上清液；在冰水浴中，用的3?6mol/L的NaCl溶液緩慢加入上清液中，不斷攪拌至溶液中白色的絮狀物不再析出，4°C沉淀10小時，去除上清液，絮狀溶液高速冷凍離心處理，收集沉淀2.用0.03?0.06mol/L的檸檬酸溶液溶解沉淀物，成透明澄清黏稠溶液；在冰水浴中，調節pH=6.5，用的3?6mol/L的NaCl溶液緩慢加入上清液中，不斷攪拌至溶液中白色的絮狀物不再析出，4°C沉淀10小時，去除上清液，去除上清液，絮狀溶液高速冷凍離心處理，收集沉淀。制備鼠尾膠原：吸去生理鹽水，將尾腱稱重（0.5-1克）。正規鼠尾膠原直銷廠家

鼠尾膠原醋酸溶解：在2-8度中放置過夜。武漢鼠尾膠原生產廠家

鼠尾Ⅰ型膠原：組裝液的配置：1.50mmol/L甘氨酸+200mmol/L氯化鉀100mL，用1mol/L氫氧化鈉調節酸堿度至9.2。2.膠原纖維的重構吸取膠原10μL至小培養皿中，倒入0.5mL自組裝液，室溫放置20min。予自組裝液自組裝24h。吸取0.05%戊二醛2mL至小培養皿中，將自組裝24h的膠原浸泡在戊二醛中。然后將膠原經去離子水、50%乙醇、100%乙醇依次漂洗后進行TEM觀察。3.生物礦化形成仿生骨材料靜滴配置鈣磷礦化液將25mL鈣液(10mmol/L二水氯化鈣+150mmol/L氯化鈉+50mmol/L三羥甲基氨基甲烷+0.02%三氮化鈉)倒入燒杯中，滴入聚丙烯(PAA)至濃度350μg/mL；滴加1mol/L的氯化氫，調節酸堿度至7.4，然后緩慢滴入25mL磷液(6mmol/L磷酸氫二鈉)，約16滴/min。武漢鼠尾膠原生產廠家