外泌體研究思路。外泌體研究通常與高通量測序的聯(lián)系緊密,研究思路可以分為三大類:表達譜、分子標(biāo)志物和分子機制方向,其中表達譜思路的特點就是短平快、通常以測序數(shù)據(jù)為主要內(nèi)容,短平快發(fā)表3-5分文章。而分子標(biāo)志物的特點是在表達譜基礎(chǔ)之上加入大量樣本驗證,建立ROC、KM曲線,分析分子與臨床疾病的相關(guān)性為主,通常文章影響因子在3-10分之間。分子機制研究,顧名思義要做到細(xì)胞功能、機制研究深度,因此工作量通常較大,影響因子通常能夠上10+。唐山正規(guī)外泌體提取試劑產(chǎn)品介紹在體內(nèi)參與細(xì)胞通訊、細(xì)胞遷移、促血管新生和抗一些病癥免疫等生理過程,與多種疾病的發(fā)生和進程密切相關(guān)多種細(xì)胞在正常及病理狀態(tài)下均可分泌外泌體。南京正規(guī)外泌體提取試劑廠家批發(fā)價
作為一種分子通斷開關(guān)的KRAS發(fā)生突變時會處于“開啟”狀態(tài)。在80%~95%的胰腺導(dǎo)管腺病(PDAC)當(dāng)中,這個基因發(fā)生突變,這也是這種一些疾病中較為常見的突變。這些研究人員證實iExosome能夠運送特異性地靶向KRAS的siRNA和shRNA分子,并且比他們的合成對應(yīng)物脂質(zhì)體(liposome)更加高效。脂質(zhì)體不具有外泌體表現(xiàn)出的天然復(fù)雜性和優(yōu)勢。德州大學(xué)MD安德森一些疾病中心一些疾病生物學(xué)助理教授ValerieLeBleu博士說,“我們的研究提示著與脂質(zhì)體相比,外泌體表現(xiàn)出運送siRNA分子和壓制侵襲性胰腺瘤生長的優(yōu)異能力。我們也證實外泌體表面上的CD47存在允許它們躲避來自循環(huán)單核細(xì)胞的吞噬作用。”開封外泌體提取試劑直銷價外泌體的提取、分離方法:開發(fā)高效、快速、穩(wěn)定,并且保持外泌體結(jié)構(gòu)和生物功能完整性的方法。
外泌體可通過流式、WB(檢測指標(biāo)有CD9,CD63,CD81)、電鏡觀察、NTA粒徑追蹤等手段檢測,普遍應(yīng)用于藥物載體、疾病診斷marker、精細(xì)醫(yī)療、一些病癥治病等方面研究。由于外泌體直徑小,樣本含量低,提取十分困難。已有的外泌體分離方式有密度梯度離心、超濾離心法、免疫磁珠抗體捕獲、商用試劑盒等。但到目前為止,仍沒有一種提取方法能同時保證外泌體的含量、純度以及生物活性。外泌體是細(xì)胞間進行物質(zhì)運輸和信息交流的重要工具,可以通過調(diào)節(jié)免疫功能促進一些病癥的增殖,血管新生和一些病癥轉(zhuǎn)移。與細(xì)菌傳染,幫助細(xì)菌逃避免疫關(guān)系很大,并與心血管疾病,老年癡呆等疾病具有密切關(guān)系。
有的外泌體分離方法需要高速離心,需要使用大型機器,耗費近24小時的時間才能獲得,非常不便。而高離心力也可能破壞囊泡。降低樣品的質(zhì)量。這項研究有望解決這一難題。在論文中,研究人員們提供了一種通過微流體和聲學(xué)的獨特組合從體液樣品中捕獲外泌體的新穎方法。他們開發(fā)的原始聲學(xué)分選裝置由兩個傾斜的聲學(xué)換能器和一個微流體通道組成,當(dāng)這些傳感器產(chǎn)生的聲波相互碰撞時,形成產(chǎn)生一系列壓力節(jié)點的駐波。每當(dāng)細(xì)胞或顆粒流過通道并遇到一個節(jié)點時,壓力會將細(xì)胞引導(dǎo)離開中心一點點。細(xì)胞移動的距離取決于大小和其他屬性(如可壓縮性),這樣,當(dāng)?shù)竭_通道末尾時,不同大小和性質(zhì)的細(xì)胞就能夠被分離開來。這種方法分離得到的外泌體,基本上不改變其生物或物理特征,為開發(fā)評估人類健康以及疾病診斷和進展提供了有吸引力的新方法。重復(fù)離心操作還有可能對囊泡造成損害,從而降低其質(zhì)量。
外泌體的提取方法:1.超速離心法(差速離心)。超離法是較常用的外泌體純化手段,采用低速離心、高速離心交替進行,可分離到大小相近的囊泡顆粒。超離法因操作簡單,獲得的囊泡數(shù)量較多而廣受歡迎,但過程比較費時,且回收率不穩(wěn)定(可能與轉(zhuǎn)子類型有關(guān)),純度也受到質(zhì)疑;此外,重復(fù)離心操作還有可能對囊泡造成損害,從而降低其質(zhì)量。2.密度梯度離心。在超速離心力作用下,使蔗糖溶液形成從低到高連續(xù)分布的密度階層,是一種區(qū)帶分離法。通過密度梯度離心,樣品中的外泌體將在1.13-1.19g/ml的密度范圍富集。此法獲得的外泌體純度較高,但步驟繁瑣,耗時,對離心時間極為敏感同時可獲得高純度和高回收率的外泌體——如新西蘭IZON開發(fā)的系列的外泌體排阻劑。南京正規(guī)外泌體提取試劑廠家批發(fā)價
將沉淀物用PBS緩沖液進行懸浮,使外泌體懸浮于液體上層。南京正規(guī)外泌體提取試劑廠家批發(fā)價
外泌體(exosomes,Exos)是細(xì)胞分泌的一種膜囊泡,因其可以將供體細(xì)胞的信息通過其攜帶的蛋白質(zhì)、mRNA、miRNA等傳遞到受體細(xì)胞,實現(xiàn)細(xì)胞之間的信息交流及物質(zhì)交換,并且可以作為藥物載體轉(zhuǎn)運藥物而引起科學(xué)家的普遍關(guān)注(Fig1)。外泌體作為內(nèi)源性的天然藥物載體有著獨特的優(yōu)勢,表面由脂質(zhì)和蛋白質(zhì)組成,使其可以穿透許多生物膜,提高藥物的運輸效率和靶向性,可以穩(wěn)定存在于血液中,納米級尺寸明顯增強藥物在瘤部位的滲透滯留效應(yīng)(permeabilityandretentioneffect,EPR)。目前,許多抗藥物、基因藥物及藥物均被成功載入外泌體。但是由于沒有較好的外泌體分離純化和載藥的方法,使得其作為藥物載體的應(yīng)用受到限制。南京正規(guī)外泌體提取試劑廠家批發(fā)價