染色的原理和臨床意義:在同一張涂片上進行兩種酯酶染色的方法稱為酯酶雙染色。多數采用一種特異性酯酶加一種非特異性酯酶染色,常用的有α-醋酸萘酚酯酶與氯乙酸AS-D萘酚酯酶雙染色、α-丁酸萘酚酯酶與氯乙酸AS-D萘酚酯酶雙染色等。反應的原理基本上同各自的染色原理,同一張涂片上的細胞要分別在兩種不同的基質液中作用一定時間,較后復染、顯微鏡觀察。酯酶雙染色可同時觀察兩種不同的白血病細胞,因此在鑒別白血病類型方面明顯優于單項染色。急性粒-單核細胞白血病該染色法在急性粒-單核細胞白血病的同一張涂片上可分別出現α-NBE染色和NAS-DCE染色陽性反應的細胞,甚至少數病例在單個細胞內同時出現以上兩種酯酶染色的雙重陽性反應,因此酯酶雙染色反應在急性粒-單核細胞白血病的診斷上具有獨特價值。無水酒精滲透較慢,而且容易產生極化。浙江品質好的糖原染色試劑盒廠家供應
糖原染色:細胞內含1,2-乙二醇基的多糖類經過碘酸氧化后產生醛基,與特殊染液作用,使無色品紅變成紅色化合物,沉淀于胞質之中。紅色的深淺與細胞中起反應的1,2-乙二醇基的量呈正比。用于不典型巨核細胞與李—斯細胞的鑒別,前者PAS反應為強陽性,后者為陰性或弱陽性;用于高雪細胞和尼曼一匹克細胞的鑒別,前者PAS反應為強陽性,而后者反應為陰性或弱性。正常值正常情況下,紅細胞系統的原、幼紅細胞和成熟紅細胞;粒細胞系統的原粒細胞、原單核細胞和大多數淋巴細胞為陰性反應。自早幼粒階段以后的粒細胞和幼單核細胞可呈弱陽性反應。湖南正規糖原染色試劑盒進貨價骨骼肌活檢臨床操作及染色質量控制。
糖原染色在使用過程中需要注意以下幾個方面:PAS染色時需于暗處加蓋反應,染色時間10~20min(染色時間長短取決于試劑的質量和環境溫度,SO濃度高,染色時間適當縮短;環境溫度高,染色時間也應適當縮短,反之則需適當延長反應時間)。染色過程中不能接觸伊紅,以免造成顏色誤差[4]。作糖原染色時,較好作消化對照,即取兩張連續切片,其中一張脫蠟至水后,用1%淀粉酶于37℃消化30min,水洗后與不經消化處理的切片一起置0.5%高碘酸液氧化,如經消化處理的切片染色陰性,不經消化處理的切片染色陽性,即肯定為糖原[6]。偏重亞硫酸鈉(鉀)溶液配置后,不能保存,因此,必須現配現用,用過一次即應廢棄。各種試劑必須是化學純或者分析純。器皿、染色缸必須潔凈而干燥。
糖原pas染色液配制及使用方法:1、常規固定,常采用10%的福爾馬林,常規脫水包埋。2、石蠟切片脫蠟入蒸餾水;冰凍切片直接入蒸餾水。3、自來水沖洗2~3min,再用蒸餾水浸洗2次。4、入過碘酸溶液,室溫放置,一般不宜超過10min。5、自來水沖洗1次,再用蒸餾水浸洗2次。6、入SchiffReagent,置于室溫陰暗處浸染。7、自來水沖洗10min。8、入蘇木素染色液,染細胞核。9、酸性乙醇分化液分化。_x005f_x005f_x005f_x000c_10、自來水沖洗10~15min,更換蒸餾水清洗,使其返藍。11、逐級常規乙醇脫水。二甲苯透明,中性樹膠封固。應該盡可能割取生活著的組織塊,并隨即投入固定液。
PAS技術是很少可檢測不同種類的黏液物質(如糖原、黏蛋白和糖蛋白)的方法,但PAS技術卻不能區別黏蛋白和糖原。若要冸確鑒別黏液物質(如黏蛋白或糖原),需加入糖原消化步驟。大多數情冴下可用α–淀粉酶或麥芽淀粉酶來催化糖原的糖苷鍵水解,形成水溶性的雙糖-麥芽糖,在應用PAS技術之前將糖原從組織切片上除去。人類的唾液被認為是消化糖原的一種有效手段,但是出于安全以及缺乏標冸唾液的考慮,不主張應用唾液。所以網狀纖維的組織化學染色,在臨床病理診斷上占著相當重要的位置。再糖原染色,可鑒別是糖原還是其他多糖類物質。福建哪家提供糖原染色試劑盒進貨價
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糖原及粘液染色法注意事項:1、糖原的固定要及時,而且標本要新鮮。2、如用無水酒精作糖原的固定劑,有它的弊病,因無水酒精滲透較慢,而且容易產生極化,(極化是糖原顆粒趨向于細胞的一端)。故用Gendre氏固定液效果較佳,其配法如下:苦味酸飽和于95%酒精85ml40%甲醛10ml冰醋酸5ml3、各種試劑必須化學純,亞硫酸鈉須有濃厚氣味,器皿必須潔凈而干燥,染色缸亦是。4、如果Schiff氏試劑,在經過活性碳吸附漂白后不顯無色,首先應考慮試劑中的偏重亞硫酸鈉是否失效。如果偏重亞硫酸鈉氣味不濃,使用時可考慮適當的增加用量。其次考慮堿性品紅本身,常常雖屬同一生產廠家,但不同批號,其效果就可能不同,應特別引起注意。浙江品質好的糖原染色試劑盒廠家供應