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細胞轉染的注意事項：細胞狀態這點非常重要，不要急于求成，一定要讓細胞處于較佳的生長狀態再做。有文獻說傳代不要超過17代。細胞復蘇后的3代左右時細胞狀態較好，不要用傳了很多代的細胞去做，細胞的形態都會發生變化。大多數已建立的細胞系都是非整倍體，原代培養包括了表達不同基因組合的細胞的混合物。細胞培養在實驗室中保存數月和數年后會經歷突變，總染色體重組或基因調控變化等而演化。這會導致和轉染相關的細胞行為的變化。如果隨時間發現這種變化，融化一管新鮮的細胞可能會恢復原先的轉染活性。因此，如果觀察到轉染效率降低，可以試著轉染新鮮培養的細胞以恢復較佳結果。或者，幾種來源于經篩選，轉染效率較高細胞亞系的細胞系現在有售對于轉染相同量的DNA所需的較佳陽離子脂質體試劑的量會因細胞密度而異。合肥正規細胞高效轉染試劑價格

細胞轉染：(1)轉染試劑的準備A.將400ul去核酸酶水加入管中，震蕩10秒鐘，溶解脂狀物。B.震蕩后將試劑放在-20攝氏度保存，使用前還需震蕩，。(2)選擇合適的混合比例(1：1-1：2/脂質體體積：DNA質量)來轉染細胞。在一個轉染管中加入合適體積的無血清培養基。加入合適質量的MyoD或者EGFP的DNA，震蕩后在加入合適體積的轉染試劑，再次震蕩。(3)將混合液在室溫放置10—15分鐘。(4)吸去培養板中的培養基，用PBS或者無血清培養基清洗一次。(5)加入混合液，將細胞放回培養箱中培養一個小時。(6)到時后，根據細胞種類決定是否移除混合液，之后加入完全培養基繼續培養24-48小時。合肥正規細胞高效轉染試劑直銷廠家當復合物接近細胞膜時，通過內吞作用形成內體進入細胞。

細胞轉染的原理、操作步驟以及小技巧：脂質體轉染操作步驟：(1)細胞培養：取6cm細胞皿，向每孔中加入2mL含1~2×105個細胞培養液，37℃CO2培養密度至40%~60%，密度過大，轉染后不利篩選細胞。(2)轉染液制備：在EP管中制備以下兩液(為轉染每一個孔細胞所用的量)A液：用不含血清培養基稀釋1ug質粒DNA。B液：用不含血清培養基稀釋2ul脂質體。分別將A液與B液輕彈混勻，靜置5分鐘。(3)吸取B液加入至A液中，輕彈混勻。室溫中置10-15分鐘。(4)轉染準備：用1mL不含血清培養液漂洗兩次，再加入4mL不含血清培養液。(5)轉染：把A/B復合物緩緩加入培養液中，搖勻，37℃溫箱置6~24小時，吸除無血清轉染液，換入正常培養液繼續培養。(6)瞬時轉染后，可在48h-72h細胞長滿之后，提取細胞蛋白或者RNA，驗證敲減/過表達效率。

細胞轉染實驗簡介：實驗原理外源基因進入細胞主要有四種方法：電擊法、磷酸鈣法和脂質體介導法和細菌介導法。電擊法是在細胞上短時間暫時性的穿孔讓外源質粒進入;磷酸鈣法和脂質體法是利用不同的載體物質攜帶質粒通過直接穿膜或者膜融合的方法使得外源基因進入細胞;細菌法是利用包裝了外源基因的細菌傳染細胞的方法使得其進入細胞。但是由于電擊法和磷酸鈣法的實驗條件控制較嚴、難度較大;細菌法的前期準備較復雜、而且可能對于細胞有較大影響;所以現在對于很多普通細胞系，一般的瞬時轉染方法多采用脂質體法總染色體重組或基因調控變化等而演化。

細胞轉染為什么不能加血清：不同的細胞及轉染試劑要求轉染的條件是不同的。較好是在靠前次實驗前做一個預實驗，比如：HeLa，293，CHO，COS7，MCF－7，HepG2等細胞，是否加血清，對不同的細胞是有不同的影響的，有些細胞是可以有血清的，有些加血清就會受影響。轉染后在6小時左右較好換液且換為有血清的培養基，其一因為普通轉染試劑對細胞的毒性作用大，其二可降低因血清的缺乏引起的細胞的死亡。轉染時不加血清是防止血清的干擾作用，轉染后可適時加入。加入過早會引起未轉染細胞的優勢生長，過晚會引起較多細胞死亡。可實時觀察1/5細胞變圓的時候加入血清脂質體轉染適用于把DNA轉染入懸浮或貼壁培養細胞中。太原正規細胞高效轉染試劑推薦廠家

瞬時和穩定表達DNA轉染后，轉入基因的表達可以在1－4天內檢測到。合肥正規細胞高效轉染試劑價格

瞬時轉染和轉染效率的監測：基因的瞬時表達在24-72小時內就結束了。這種快速的瞬時表達非常適用于驗證質粒表達和監測轉染步驟的效率。可以使用報告基因來確定優化條件，其表達蛋白易檢測，在目的細胞中不含此蛋白或水平很低。常用的報告基因包括氯霉素乙酰轉移酶（CAT），綠色熒光蛋白（GFP），熒光素酶（Lux或Luc）以及b-半乳糖苷酶（b-gal）。可以使用簡單的非同位素方法檢測b-gal的表達以測定轉染效率和活性。pCMVSPORT-bgal質粒包含CMV啟動子調控下的LacZ基因，轉染入真核細胞內后可以直接表達bgal。結合簡單的檢測步驟，可以做為監測轉染條件的一種方便靈敏的方法。合肥正規細胞高效轉染試劑價格