正規細胞高效轉染試劑哪家好

轉染的注意事項：培養基中的物品物品，比如青霉素和鏈霉素，是影響轉染的培養基添加物。這些物品一般對于真核細胞無毒，但陽離子脂質體試劑增加了細胞的通透性，使物品可以進入細胞。這降低了細胞的活性，導致轉染效率低。所以，在轉染培養基中不能使用物品，甚至在準備轉染前進行細胞鋪板時也要避免使用物品。這樣，在轉染前也不必潤洗細胞。對于穩定轉染，不要在選擇性培養基中使用青霉素和鏈霉素，因為這些物品是GENETICIN選擇性物品的競爭性克制劑。另外，為了保證無血清培養基中細胞的健康生長，使用比含血清培養基更少的物品量。大多數已建立的細胞系都是非整倍體，原代培養包括了表達不同基因組合的細胞的混合物。細胞培養在實驗室中保存數月和數年后會經歷突變，總染色體重組或基因調控變化等而演化，這會導致和轉染相關的細胞行為的變化。如果隨時間發現這種變化，融化一管新鮮的細胞可能會恢復原先的轉染活性。比如，新鮮融化的NIH3T3細胞比傳代8次的細胞表現出更高的轉染效率，融化細胞的進一步傳代并沒有降低轉染效率。因此，如果觀察到轉染效率降低，可以試著轉染新鮮培養的細胞以恢復較佳結果來指示細胞中目標基因是否存在，這樣的報告基因一般可以在轉染后一兩天內檢測到。正規細胞高效轉染試劑哪家好

細胞轉染之PEI轉染法：1.細胞分盤：通過胰酶消化收集細胞，用適當的完全培養基以1×105至4×105細胞/cm2的密度平鋪細胞于35mm培養皿上（根據實驗需要選擇培養皿，使細胞貼壁后所占面積達到培養皿總面積的70－90％）。將細胞置于含5％CO2的37℃溫箱中孵育8-24h，當細胞貼壁完全后即可開始轉染。轉染前2h換液（用1.5ml無血清培養基置換舊的培養基）。注：PEI轉染法對細胞生長有克制作用，在換液前細胞幾乎不生長，所以需要密度比較大時做轉染。2.制備PEI-DNA混合物以35mm組織培養皿用240μl反應總體積為例。先在無菌EP管中加入120μl1×HBS,再加入質粒DNA（總量1-3μg為佳），混勻后加入等體積PEI工作液，充分混勻后室溫靜置20-30min，較后將這240μl的PEI-DNA混合液逐滴加入上述單層細胞的細胞培養基中，輕輕搖動平皿混勻后置于含5％CO2的37℃溫箱孵育。珠海正規細胞高效轉染試劑廠家現貨建議選擇50%~80%區間密度進行細胞轉染。

細胞轉染常用步驟：1.轉染試劑的準備①將400ul去核酸酶水加入管中，震蕩10秒鐘，溶解脂狀物。②震蕩后將試劑放在－20攝氏度保存，使用前還需震蕩。2.選擇合適的混合比例(1：1－1：2/脂質體體積：DNA質量)來轉染細胞。在一個轉染管中加入合適體積的無血清培養基。加入合適質量的MyoD或者EGFP的DNA，震蕩后在加入合適體積的轉染試劑，再次震蕩。3.將混合液在室溫放置10―15分鐘。4.吸去培養板中的培養基，用PBS或者無血清培養基清洗一次。5.加入混合液，將細胞放回培養箱中培養一個小時。6.到時后，根據細胞種類決定是否移除混合液，之后加入完全培養基繼續培養24－48小時

細胞轉染那些事兒：1.選擇傳代次數較低并處于對數生長期的細胞進行轉染。對大多數細胞而言，均需要在轉染當天或前現在鋪板，第二天上午進行轉染，48h后收集細胞進行功能檢測。對于原代細胞，可用促有絲分裂刺激物進行細胞活化。2.對于貼壁細胞，一般要求在轉染前一日，用胰酶處理為單細胞懸液，重新接種于培養皿或瓶，較好在轉染前4小時換一次新鮮培養液。3.支原體污染會嚴重降低細胞轉染的效率，且支原體不會像細菌污染那么明顯，因而轉染前可用環丙沙星處理細胞以除去支原體。4.細胞轉染時需要一定的細胞密度，以70-90%（貼壁細胞）或2×106-4×106細胞/ml（懸浮細胞）為宜。由于脂質體對細胞有一定的毒性，所以轉染時間一般不超過24小時。

細胞轉染的注意事項：細胞狀態這點非常重要，不要急于求成，一定要讓細胞處于較佳的生長狀態再做。有文獻說傳代不要超過17代。細胞復蘇后的3代左右時細胞狀態較好，不要用傳了很多代的細胞去做，細胞的形態都會發生變化。大多數已建立的細胞系都是非整倍體，原代培養包括了表達不同基因組合的細胞的混合物。細胞培養在實驗室中保存數月和數年后會經歷突變，總染色體重組或基因調控變化等而演化。這會導致和轉染相關的細胞行為的變化。如果隨時間發現這種變化，融化一管新鮮的細胞可能會恢復原先的轉染活性。因此，如果觀察到轉染效率降低，可以試著轉染新鮮培養的細胞以恢復較佳結果。或者，幾種來源于經篩選，轉染效率較高細胞亞系的細胞系現在有售~瞬時表達分析檢測未重組質粒DNA上基因的表達。重慶正規細胞高效轉染試劑直銷廠家

當復合物接近細胞膜時，通過內吞作用形成內體進入細胞。正規細胞高效轉染試劑哪家好

轉染的注意事項：細胞鋪板密度用于轉染的較佳細胞密度根據不同的細胞類型或應用而異。一般轉染時，貼壁細胞密度為70%-90%，懸浮細胞密度為2×106-4×106細胞/ml時效果較好。確保轉染時細胞沒有長滿或處于靜止期。因為轉染效率對細胞密度很敏感，所以在不同實驗間保持一個基本的傳代步驟很重要。鋪板細胞數目的增加可以增加轉染活性和細胞產量。在三種不同密度進行細胞鋪板的比較表明鋪板密度較高的，CAT活性也較高。得到較高活性所需的LIPOFECTAMINE試劑的量也相應增加了。這些結果說明，對于轉染相同量的DNA所需的較佳陽離子脂質體試劑的量會因細胞密度而異正規細胞高效轉染試劑哪家好