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細胞轉染的注意事項：細胞狀態這點非常重要，不要急于求成，一定要讓細胞處于較佳的生長狀態再做。有文獻說傳代不要超過17代。細胞復蘇后的3代左右時細胞狀態較好，不要用傳了很多代的細胞去做，細胞的形態都會發生變化。大多數已建立的細胞系都是非整倍體，原代培養包括了表達不同基因組合的細胞的混合物。細胞培養在實驗室中保存數月和數年后會經歷突變，總染色體重組或基因調控變化等而演化。這會導致和轉染相關的細胞行為的變化。如果隨時間發現這種變化，融化一管新鮮的細胞可能會恢復原先的轉染活性。因此，如果觀察到轉染效率降低，可以試著轉染新鮮培養的細胞以恢復較佳結果。或者，幾種來源于經篩選，轉染效率較高細胞亞系的細胞系現在有售~脂質體可以和帶負電荷的核酸結合后重新形成復合物。天津細胞高效轉染試劑推薦廠家

細胞轉染實驗簡介：實驗原理外源基因進入細胞主要有四種方法：電擊法、磷酸鈣法和脂質體介導法和細菌介導法。電擊法是在細胞上短時間暫時性的穿孔讓外源質粒進入;磷酸鈣法和脂質體法是利用不同的載體物質攜帶質粒通過直接穿膜或者膜融合的方法使得外源基因進入細胞;細菌法是利用包裝了外源基因的細菌傳染細胞的方法使得其進入細胞。但是由于電擊法和磷酸鈣法的實驗條件控制較嚴、難度較大;細菌法的前期準備較復雜、而且可能對于細胞有較大影響;所以現在對于很多普通細胞系，一般的瞬時轉染方法多采用脂質體法蘇州正規細胞高效轉染試劑廠家供應加入混合液，將細胞放回培養箱中培養一個小時。

細胞轉染的原理、操作步驟以及小技巧：一、脂質體(Liposome)轉染方法原理脂質體作為體內和體外輸送載體的工具，已經研究的十分普遍，中性脂質體是利用脂質膜包裹DNA，借助脂質膜將DNA導入細胞膜內。帶正電的陽離子脂質體，DNA并沒有預先包埋在脂質體中，而是帶負電的DNA自動結合到帶正電的脂質體上，形成DNA-陽離子脂質體復合物，從而吸附到帶負電的細胞膜表面，經過內吞被導入細胞。優點:與其它方法相比，有較高的效率和較好的重復性，它適用于把DNA轉染入懸浮或貼壁培養細胞中，是目前條件下較方便的轉染方法之一

細胞轉染之PEI轉染法：1.細胞分盤：通過胰酶消化收集細胞，用適當的完全培養基以1×105至4×105細胞/cm2的密度平鋪細胞于35mm培養皿上（根據實驗需要選擇培養皿，使細胞貼壁后所占面積達到培養皿總面積的70－90％）。將細胞置于含5％CO2的37℃溫箱中孵育8-24h，當細胞貼壁完全后即可開始轉染。轉染前2h換液（用1.5ml無血清培養基置換舊的培養基）。注：PEI轉染法對細胞生長有克制作用，在換液前細胞幾乎不生長，所以需要密度比較大時做轉染。2.制備PEI-DNA混合物以35mm組織培養皿用240μl反應總體積為例。先在無菌EP管中加入120μl1×HBS,再加入質粒DNA（總量1-3μg為佳），混勻后加入等體積PEI工作液，充分混勻后室溫靜置20-30min，較后將這240μl的PEI-DNA混合液逐滴加入上述單層細胞的細胞培養基中，輕輕搖動平皿混勻后置于含5％CO2的37℃溫箱孵育。這會導致和轉染相關的細胞行為的變化。

細胞轉染的注意事項：物品(PS)物品，比如青霉素和鏈霉素，是影響轉染的培養基添加物。這些物品一般對于真核細胞無毒，但陽離子脂質體試劑增加了細胞的通透性，使物品可以進入細胞。這降低了細胞的活性，導致轉染效率低。所以，在轉染培養基中不能使用物品，甚至在準備轉染前進行細胞鋪板時也要避免使用物品。這樣，在轉染前也不必潤洗細胞。對于穩定轉染，不要在選擇性培養基中使用青霉素和鏈霉素，ICIN選擇性物品的競爭性克制劑。另外，為了保證無血清培養基中細胞的健康生長，使用比含血清培養基更少的物品量~瞬時轉染與穩定轉染常規轉染技術根據基因表達時間的長短可分為兩大類。珠海細胞高效轉染試劑報價

有血清時的轉染 血清一度曾被認為會降低轉染效率。天津細胞高效轉染試劑推薦廠家

細胞轉染效率影響因素：1.細胞密度一般來說，當細胞密度達到60%～80%時進行轉染可以取得較高的轉染效率，過低或過高都會影響轉染效果。2.細胞生長狀態這點非常關鍵，很多時候傳代次數太少或者太多都將導致細胞對轉染試劑敏感度的改變。因此，為了提高轉染效率以及轉染穩定性、降低細胞毒性，應盡量使用適度傳代的細胞系，并在不同次實驗時保持細胞傳代次數的一致性。3.細胞種類不同細胞種類的細胞在做轉染時所需要的轉染體系是不同的，不能一種體系用在所有類型細胞的轉染實驗天津細胞高效轉染試劑推薦廠家