RNA提取試劑的選擇:選擇合適的提取試劑是較重要的一步。好的提取試劑在確保成功的同時,操作方便且經濟實用。對于動物組織、簡單的植物材料、各種微生物、培養細胞的totalRNA提取,Takara公司的RNAisoPlus具有諸多的成功案例。隨著2013年7月柱型提取試劑TaKaRaMiniBESTUniversalTotalRNAExtractionKit的成功上市,進一步豐富了TakaraRNA提取的產品線。該產品采用了獨特的細胞裂解系統,無需苯酚氯仿抽提等步驟,簡單快捷。組織或細胞裂解后,提取操作光需20分鐘便可完成在實際RNA提取中,有幾個提取原則:保證RNA一級結構的完整性。廈門RNA提取試劑哪家好
RNA提取醇沉淀不是越多就越好。有些實驗方案會推薦,在異丙醇沉淀后,用乙醇沉淀兩次。實際上,任何提取實驗,都會在純度和得率這一對矛盾中取舍。醇沉淀會將脂溶性雜質去掉,但部分非脂溶性的雜質依然會連同RNA一起被沉淀下來。因此,多整幾次,并不會讓RNA的純度翻倍,反而還會有降低得率的風險。一般情況下,異丙醇和乙醇各沉淀一次即可。但是,倘若預計RNA濃度很低,那就只能放棄純度,在低溫沉淀數小時,以換來較高的得率。圍繞DEPC的玄學。許多實驗方案會推薦使用0.1%DEPC處理RNA相關用水,以滅活RNase。這一點是要肯定的。不過,在使用DEPC的過程中,又充斥著一些玄學。高壓滅菌后的DEPC水,會有一股“香甜”的味道。許多人會以為那是殘留的DEPC而不敢用。實際上,這只是DEPC分解成CO2和乙醇后,產生的一些揮發性酯類副產物。上海正規RNA提取試劑進貨價rRNA是組成核糖體的部分,而核糖體是蛋白質合成的場所。
新型土壤總RNA快速提取試劑盒:獨特裂解劑/裂解液迅速裂解細胞和滅活細胞內核酸酶,然后RNA在高離序鹽狀態下選擇性吸附于玻璃奶,然后將粗純化的玻璃奶轉移到離心柱,再通過一系列快速的漂洗-離心的步驟,漂洗液將腐植酸、細胞代謝物、蛋白等雜質去除,較后低鹽的洗脫緩沖液將純凈RNA從硅基質膜上洗脫。試劑盒特點:離心吸附柱內硅基質膜全部采用進口世界有名公司特制吸附膜,柱與柱之間吸附量差異極小,可重復性好。克服了國產試劑盒膜質量不穩定的弊端。兼容性強,適用于各種不同的土壤、糞便以及其他soil.不需要使用有毒的苯酚等試劑,也不需要乙醇沉淀等步驟。快速,簡捷,單個樣品操作一般可在1小時內完成。多次柱漂洗確保高純度,OD260/OD280典型的比值達1.9以上,可直接用于PCR,Northern-blot和各種酶切反應
RNA提取注意事項:1、組織樣本要盡可能的新鮮,避免反復凍融。2、提取時組織要充分研磨,組織量不宜過少,更不宜過多。3、加入裂解液后應給予充分的孵育時間,使樣本充分裂解。4、在用Trizol法提取時,分層后吸取上清的原則是“寧愿少吸,不能多吸”,千萬不能提取到中間層,否則會導致嚴重的基因組DNA污染。5、洗滌時洗滌液應充分浸潤到管壁的四周,確保洗滌徹底。6、柱式提取法,洗滌完后除了對柱子進行空離后,還應當將吸附柱置于超凈臺內吹風5~10min,使有機溶劑充分揮發干。7、柱式法較后洗脫時候,當加入DEPC水后還應孵育3~5min,或者提前將DEPC水加熱至60℃,可提高洗脫得率。傳統的Trizol裂解異丙醇沉淀法較后RNA是用DEPC水溶解沉淀,則應當給予適當溶解時間,并用泵頭不斷吹吸離心管底部。異硫氰酸胍屬于解偶劑,是一類強力的蛋白質變性劑,可溶解蛋白質。
RNA提取關鍵點:RNA的產量和質量也是另無數人頭疼的問題,較佳方法是保證樣品完全裂解,但相同的裂解方案換了一個樣本可能就沒轍了。為了提高裂解效果,可以將裂解緩沖液與機械裂解步驟(研磨珠破碎)匹配,或者在裂解液上游加入酶裂解步驟(如蛋白酶K、溶菌酶等)。BIOG血液RNA快速提取試劑盒是公司研發團隊在綜合比較了國外同類較好產品的基礎上反復研制優化而成,專門用于血液RNA的快速提取純化。本試劑盒采用獨特的裂解液配方,可直接從新鮮、冷凍或陳舊的全血中提取高質量的RNA,操作簡便快速,只需15分鐘即可完成血液RNA提取。RNA提取得率較高,可在200μL全血中提取5μg左右RNA。BIOG血液RNA快速提取試劑盒采用了較新的較好離子膜,裂解液和洗脫液經過多次優化,有效地去除了蛋白、色素、脂類等雜質污染,特別適用于血液包括細菌、病菌等傳染的分子檢測。植物RNA提取試劑產品特點:操作安全可靠,無需酚抽提。徐州正規RNA提取試劑供應商
RNA提取試劑注意事項:必須戴一次性手套操作。廈門RNA提取試劑哪家好
血漿/血清中miRNA提取試劑盒:是專門針對血清、血漿樣本中miRNA提取而開發的,利用吸附柱法從血清、血漿樣品中簡單快捷提取高純度高質量的miRNA。該試劑盒中的裂解液miRBP1及柱結合液miRBP2具有高效裂解及提取效果。試劑盒中的吸附柱采用特殊的硅基質膜材料,對RNA尤其是smallRNA(<200nt)具有結合能力,與常用的抗凝劑(包括肝素、EDTA、檸檬酸鈉、草酸鈉)兼容,得到的miRNA可直接用于RT-PCR和Northern雜交等后續分子生物學實驗操作。普通植物總RNA提取試劑盒:采用進口硅基質膜制作的總RNA吸附柱,可以從普通植物的根、莖、葉中快速提取總RNA,30~40分鐘內即可完成提取過程,提取的總RNA純度高,沒有DNA和蛋白質的污染,適用于RT-PCR、qRT-PCR、芯片分析、Northernblot雜交等實驗。總RNA吸附柱保證RNA提取速度快,提取效率高。高效去除植物組織中的色素、酚類等雜質,提取RNA的純度高,產量大。廈門RNA提取試劑哪家好