外泌體的提取方法:1、磁珠免疫法。外泌體表面有其特異性標記物(如CD63、CD9蛋白),用包被抗標記物抗體的磁珠與外泌體囊泡孵育后結合,即可將外泌體吸附并分離出來。磁珠法具有特異性高、操作簡便、不影響外泌體形態完整等優點,但是效率低,外泌體生物活性易受pH和鹽濃度影響,不利于下游實驗,難以普遍普及。2、多聚物沉淀法。聚乙二醇(PEG)為常用的多聚物,可與疏水性蛋白和脂質分子結合共沉淀,早先應用于從血清等樣本中收集病毒,現在也被用來沉淀外泌體,其原理可能與競爭性結合游離水分子有關。利用PEG沉淀外泌體存在不少問題:比如純度和回收率低,雜蛋白較多(假陽性),顆粒大小不均一,產生難以去除的聚合物,機械力或者吐溫-20等化學添加物將會破壞外泌體等。用于外泌體提取的體液收集注意事項:避免劇烈搖晃。珠海外泌體提取試劑報價
外泌體在肺病治病中的作用:有研究發現,使用外泌體運載紫杉醇(PTX)可顯著提高病細胞對PTX的吸收,將PTX加載至外泌體中顯著增加了藥物細胞毒性,Exo-PTX能顯著壓制肺病的發展。Aqil等在進行裸鼠實驗時發現,加載至外泌體中的雷公藤紅素(Exo-CEL)比普通的CEL有更強的抗一些病癥功效,且在小鼠中未發現明顯全身性或系統性毒性,由此可以證明,外泌體制劑可以有效增強CEL功效并降低與劑量有關的毒性。到目前為止,外泌體在肺病治病方面的研究主要集中于免疫壓制,有效的外泌體藥物遞送平臺的搭建以及外泌體相關的潛在治病靶點的探索。已有的研究表明外泌體在肺病治病領域有著廣闊的前景,期待外泌體在肺病治病領域早日得到突破,造福更多的患者。開封正規外泌體提取試劑供應商超濾離心法簡單高效,且不影響外泌體的生物活性,但同樣存在純度不高的問題。
外泌體(exosomes,Exos)是細胞分泌的一種膜囊泡,因其可以將供體細胞的信息通過其攜帶的蛋白質、mRNA、miRNA等傳遞到受體細胞,實現細胞之間的信息交流及物質交換,并且可以作為藥物載體轉運藥物而引起科學家的普遍關注(Fig1)。外泌體作為內源性的天然藥物載體有著獨特的優勢,表面由脂質和蛋白質組成,使其可以穿透許多生物膜,提高藥物的運輸效率和靶向性,可以穩定存在于血液中,納米級尺寸明顯增強藥物在瘤部位的滲透滯留效應(permeabilityandretentioneffect,EPR)。目前,許多抗藥物、基因藥物及藥物均被成功載入外泌體。但是由于沒有較好的外泌體分離純化和載藥的方法,使得其作為藥物載體的應用受到限制。
外泌體的提取方法學規范、統一定量及鑒定等。關于外泌體的提取有超速離心、試劑盒、超濾法、蔗糖密度梯度離心等,然而各種方法均有其利弊。超速離心法是目前外泌體相關文章中的主流方法,由于離心步驟繁瑣,費事費力,而且步驟多導致實驗中容易污染,且損耗量大,使得較終回收的外泌體不穩定。而且對于抽提細胞上清來說,更是極為不請便,試想用提取300ml的上清需要6個50ml離心管,無論是過濾還是后續的每一步的離心去沉淀,都具有操作極其不便的缺點,總之非常麻煩。而超濾法存在外泌體會堵塞膜孔,造成濃縮效率低,濃縮管重復利用差,甚至堵塞在膜孔的外泌體還可能會粘連成團,造成損失及較后的數據有誤差,對于后續實驗也有影響。可以使用NanoSight?或電子顯微鏡分析純化的外泌體,以評估近似外泌體大小范圍和濃度。
研究中研究人員發現,胃病細胞周圍富含TAM。TAM以M2極化表型為特征,并促進胃病細胞在體外和體內的遷移。此外,研究人員發現M2衍生的外泌體決定了TAMs介導的遷移活動。通過使用質譜方法,研究人員確定載脂蛋白E(ApoE)是M2巨噬細胞衍生的外泌體中高度特異性和有效的蛋白質。ApoE是一種M2特異性且高度豐富的來源于M2外泌體的蛋白質,是決定胃病細胞遷移潛力的主要驅動因素。然而,來自ApoE-/-的小鼠M2巨噬細胞的外泌體在體外和體內對胃病細胞的遷移沒有顯著影響。在機制上,M2巨噬細胞衍生的外泌體介導ApoE啟動的PI3K-Akt信號通路,并在TAM和受體胃病細胞之間進行細胞間轉移,促進細胞骨架的遷移。總的來說,該研究發現外泌體介導的功能性ApoE蛋白從TAM轉移到一些病癥細胞,促進了胃病細胞的遷移。機械力或者吐溫-20等化學添加物將會破壞外泌體等,因此發表文章時易受質疑。上海外泌體提取試劑廠家批發價
多聚物沉淀法早先應用于從血清等樣本中收集病毒,現在也被用來沉淀外泌體。珠海外泌體提取試劑報價
外泌體相關蛋白質與肺病的診斷:近年來眾多文獻報道,肺病細胞分泌的外泌體中富含多種蛋白質并促進肺病的發生的發展,是早期診斷肺病的有效途徑。有研究發現,NSCLC患者肺組織外泌體表面EGFR免疫染色呈陽性的占80%,而慢性肺炎組織的外泌體EGFR呈陽性的只占2%,因而認為外泌體的EGFR蛋白可以用作NSCLC與慢性肺炎鑒別診斷的生物標志物。Park等通過Sys-BodyFlu-id數據庫分析發現153種特異性胸腔積液外泌體蛋白質,進一步的Westernblotting分析顯示多種特異性胸腔積液外泌體蛋白參與EGFR信號傳導途徑以促進一些病癥的發生的發展,因此外泌體蛋白可能作為肺病診斷篩查的生物學標記物。近幾年來,市場上已出現各種商業化的外泌體提取試劑盒。珠海外泌體提取試劑報價
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