無血清快速細胞凍存液,是一種新型的快速凍存細胞的保護液,可將細胞置于-80^C直接冷凍保存。NM4100內含天然抗凍蛋白(Naturalantifrereprotein),不含動物來源的血清成分,能夠有效提高細胞凍存活率和復蘇活力,減少各類病毒、霉菌和支原體等的污染,確保凍存細胞安全,能夠滿足大部分體外培養細胞的凍存需求。無血清凍存液使用方法:1、收集懸浮細胞或貼壁細胞,離心去除上清培養液。2、加入適量的細胞凍存液,重懸細胞,調節密度至1-5x10*↑/mL。3、將加有凍存液的細胞懸液分裝至凍存管中。4、將凍存管直接轉移至-80C水箱中冷凍保存。5、儲存條件:2-8C保存,年有效:-20C保存,兩年有效。無血清細胞凍存液用途:無血清細胞凍存液用于造血干細胞、間充質干細胞等干細胞的儲存。廈門無血清細胞凍存液報價
細胞凍存是細胞培養技術中細胞進行保種并長期保存的常用方法,其中細胞凍存液,作為細胞凍存時必須使用的一種溶液,不光光是說只是用來進行細胞的保存,在細胞的購買、寄贈、交換和運送過程中也起著關鍵作用,因此選擇一款好的細胞凍存液就尤為重要。如果不加任何條件直接凍存細胞,細胞內和外環境中的水都會形成冰晶,能導致細胞內發生機械損傷、電解質升高、滲透壓改變、脫水、pH值改變、蛋白變性等,從而引起細胞死亡。而細胞凍存液就相當于細胞的保護劑,在凍存細胞時將細胞懸浮于凍存液中,可使冰點降低,提高細胞膜對水的通透性,在緩慢的凍結條件下,能使細胞內水份在凍結前透出細胞,可以防止或減少冷凍冰晶對細胞的損傷作用。這樣就使細胞暫時脫離生長狀態而將其細胞特性保存起來,在需要時直接復蘇就可恢復細胞活性。開封無血清細胞凍存液生產廠家無血清凍存液使用方法:將凍存管直接轉移至-80C水箱中冷凍保存。
細胞凍存液的操作步驟:1.配置含10%DMSO或凡士林、10~20%小牛血清的凍存細胞培養液;2.取對數成長期的體細胞,除去舊細胞培養液,用PBS清理。3.除去PBS,添加適量蛋白酶(遮蓋細胞培養皿表層)把單面生長發育的體細胞消化吸收出來;4.抽濾1000rpm,5min;5.除去蛋白酶,添加適量配置好的凍存細胞培養液,用塑料吸管輕輕地吹打使體細胞勻稱,記數,調整凍存液中體細胞的較后相對密度為5牙周106/ml~1牙周107/ml;6.將體細胞分裝進凍存管中,每管1~1.5ml;7.在凍存管上標出體細胞的名字,凍存時間及作業者;8.凍存:標準的凍存程序流程為減溫速度-1~-2℃/min;當溫度達-25℃下列時,可升至-5℃~-10℃/min;到-100℃時,則可快速滲入液態氮中。也可將配有體細胞的凍存管放進-20℃電冰箱2h,隨后放進-70℃電冰箱中留宿,取下凍存管,移進液氮容器內。
細胞凍存和復蘇實驗:一般來說,細胞進行轉移和保存,較佳的策略是進行低溫保存(-70℃~-196℃),而細胞深低溫保存的基本原理是:在-70℃以下時,細胞內的酶活性均已停止,即代謝處于完全停止狀態,故而可以長期保存。細胞低溫保存的關鍵,在于通過0~20℃階段的處理過程,在此溫度范圍內,冰晶呈針狀,極易招致細胞的嚴重損傷。經過前人的長期試驗,發現細胞的凍存及復蘇基本原則是慢凍速融,這樣可以較大限度的保存細胞活力。目前細胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護劑,這兩種物質能提高細胞膜對水的通透性,加上緩慢冷凍可使細胞內的水分滲出細胞外,減少細胞內冰晶的形成,從而減少由于冰晶形成造成的細胞損傷。復蘇細胞應采用快速融化的方法,這樣可以保證細胞外結晶在很短的時間內即融化,避免由于緩慢融化使水分滲入細胞內形成胞內再結晶對細胞造成損傷。無血清細胞凍存液:一些保護劑不能穿透細胞,但可以在冰晶形成之前,優先結合細胞外的水分子。
細胞凍存:就凍存細胞而言,為了防止細胞在溫度下降時產生胞內細微冰晶,其溫度的下降不能太快。標準的操作是每一分鐘下降一度。有以下三種建議:(1)優先推薦使用程控降溫儀。(2)其次,加有異丙醇的細胞凍存盒,基本上也可以保證每分鐘1℃左右的降溫速度;(3)還有一些普遍的簡易凍存方法。如4℃半小時,-20℃半小時,然后-80℃過夜,再放入液氮;用泡沫盒(裝15mL離心管的那種)加一個保鮮袋,直接放在-80℃凍存;也可以用紗布做成袋子,將細胞懸掛在液氮上方,隔天轉入液氮;在凍存管外面包上棉花,直接放在-80℃冰箱就能夠達到緩慢降溫的效果;有的時候如果確實比較緊急的話,向96孔凍存盒的內部加滿自來水,再將凍存管放置孔中,直接置于-80℃,這樣也能夠達到緩慢降溫的目的。無血清凍存液使用方法:將加有凍存液的細胞懸液分裝至凍存管中。蕪湖無血清細胞凍存液廠家供應
無血清細胞凍存液產品性能:胎牛血清取自牛,因此,難以應用到需要避免接觸動物源的應用領域。廈門無血清細胞凍存液報價
細胞凍存和復蘇的原則是:慢凍速融,這樣更加有利于保持細胞的活力。凍存細胞不加任何保護劑,會導致細胞內冰晶的產生,從而使細胞產生內源性的機械損傷,引起細胞內環境滲透壓,PH,電解質等的改變,進而促使細胞死亡。在過去的幾十年中,科研工作者將培養基、血清和DMSO按照一定的比例配制成凍存液,并配合手工使細胞從4℃,-20℃,-80℃到液氮中逐步轉移使其達到“慢凍”的效果。但這種自制的凍存液儲存時間一般比較短,不能滿足時間跨度大的實驗項目的需求。且這樣人力和時間成本大,人手操作的誤差和血清制品的批間差也給實驗結果帶來了不穩定性。廈門無血清細胞凍存液報價
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