溫州細胞培養支原體檢測方法bst

來源：發布時間：2024-07-16

支原體檢測的樣本既可以是細胞，也可以是培養基。在細胞培養中，支原體污染是常見的問題，因此需要對細胞和培養基進行檢測。細胞庫、病毒種子批、對照細胞以及臨床用細胞等都需要進行支原體檢查，這通常包括培養法和指示細胞培養法（DNA染色法）。同時，病毒類疫苗的病毒收獲液、原液也采用培養法檢查支原體，必要時，也可以采用指示細胞培養法篩選培養基。

此外，支原體檢測的培養基推薦使用支原體肉湯培養基和精氨酸支原體肉湯培養基等，這些培養基可用于檢測藥品和生物制品中的支原體。在進行支原體檢測時，需要取培養物樣品接種到適宜支原體生長的微生物培養基或瓊脂平板上。

因此，支原體檢測的樣本既可以是細胞，也可以是培養基，具體取決于檢測的目的和方法。

細胞培養支原體污染怎么去除？溫州細胞培養支原體檢測方法bst

支原體檢測的應用場景非常廣*，以下是一些主要的應用領域：

1. 細胞培養：在實驗室和生物制品工廠中，細胞培養過程容易受到支原體污染。支原體污染可能導致細胞功能改變，影響實驗結果和生物制品的質量。因此，支原體檢測在細胞培養的質量控制中至關重要。科研中常用等溫擴增的方法簡單便捷。

2. 生物制品生產：在生物制品的生產過程中，如疫苗、生物藥物等，需要確保產品無支原體污染，以保證其安全性和有效性。監管機構要求在生產的關鍵階段進行支原體檢測。通常采用qPCR的方式進行。

蘇州支原體檢測方法細胞庫支原體檢測的必要性？

細胞培養中，支原體檢測的重要性體現在以下幾個方面：

1. 高污染發生率：支原體對培養細胞的污染發生率非常高，據估計平均發生率在60%左右。

3. 隱匿性強：支原體污染具有很高的隱匿性，早期不容易被發現，除非使用特異性和靈敏度都非常高的專業檢測試劑盒。

3. 影響實驗結果：支原體污染會改變細胞的生理性質，影響實驗結果的準確性。細胞培養物一旦被支原體污染，會改變細胞DNA、RNA及蛋白表達，導致實驗數據不準確、不穩定。

4. 難以通過肉眼或常規方法發現：支原體污染無法通過肉眼檢查細胞來發現，也不能通過向培養基中加入抗*素控制。

5. 對細胞培養數據可靠性的影響：支原體污染會降低細胞系的有效性，使得細胞培養數據失去可靠性，無法為生命科學研究提供有意義的數據。

6. 預防和控制污染的必要性：定期進行支原體檢測是細胞培養實驗室進行自我質量監控的必要組成部分，有助于及時發現并控制污染，保證實驗的準確性和重復性。

7. 避免細胞株受損：支原體污染可能導致細胞株受損，影響細胞株的質量和研究價值。及時檢測和清*支原體污染有助于保護珍貴的細胞資源

細胞培養中支原體污染的檢測方法有多種，以下是一些常用的檢測手段：

1. 顯微鏡檢測：通過相差顯微鏡觀察細胞，支原體在細胞表面和細胞之間會呈現為暗色微小顆粒。

2. 熒光染色法：使用熒光染料Hoechst 33258與DNA特異性結合，使支原體的DNA著色，然后在熒光顯微鏡下觀察。染色后的支原體會在細胞周圍或附于細胞膜表面顯示為亮綠色小點。

3. 電鏡檢查：使用掃描電鏡或透射電鏡觀察，這是一種簡便快速的方法。

4. 聚合酶鏈反應（PCR）：使用特定的引物對支原體DNA進行擴增，是一種高靈敏度的檢測方法。

5. 等溫擴增法：基于LAMP技術，室溫反應后觀察顏色變化確認是否有支原體污染。

支原體的檢測方法有哪些？

方法	靈敏度	優勢	劣勢
培養法	☆☆☆	ü 便捷 ü 便宜 ü 金標準	ü 費勞力 ü 耗時長 ü 需要特定的培養基 ü 特定支原體種類需要特定的培養基
DNA染色 (DAPI or Hoescht)	☆	ü 迅速 ü 便捷 ü 便宜	ü 可能難以判讀結果 ü 無法鑒別支原體種屬 ü 可能假陽性可能性
間接染色	☆☆☆	ü 迅速 ü 便宜 ü 易檢測	ü 費時 ü 需要細胞系指示
ELISA	☆☆	ü 迅速 ü 客觀，易判讀結果 ü 可以鑒別支原體種屬	ü 受抗體限制 ü 價格高
免疫染色	☆☆	ü 迅速 ü 可檢測支原體種屬 ü 價格略高	ü 可檢測的支原體種屬有限
放射自顯影	☆☆	ü 迅速	ü 難以判讀結果 ü 無法鑒別支原體種屬 ü 費勞力
生物發光	☆☆	ü 迅速 ü 便捷 ü 便宜	ü 難以判讀結果 ü 無法鑒別支原體種屬
PCR	☆☆☆	ü 便宜 ü 迅速 ü 具有特異性	ü 可能假陽性可能性 ü 檢測特異性依賴引物特異性 ü 需要提取DNA
Real-Time PCR	☆☆☆	ü 便捷 ü 迅速 ü 具有特異性 ü 結果可靠 ü 高通量	ü 可能假陽性可能性 ü 檢測特異性依賴引物特異性 ü 需要提取DNA
LAMP	☆☆	ü 便捷 ü 無需DNA提取 ü *需10min左右的實驗操作時間 ü 具有特異性 ü 高通量	ü 可能假陽性可能性 ü 檢測特異性依賴引物特異性細胞培養中支原體污染的后果？北京支原體去除試劑價格

支原體檢測假陽性的原因？溫州細胞培養支原體檢測方法bst

支原體去除試劑使用后，對支原體的檢測可能會有影響。一些支原體去除試劑通過特異性地與支原體膜結合、改變支原體膜的通透性來殺死支原體，而對真核細胞幾乎沒有影響。然而，某些情況下，去除試劑可能會對細胞的活力和形態產生一定的影響，尤其是在去除劑作用期間。此外，如果去除劑的效果不徹底，可能會導致細胞再次被支原體污染。

需要注意的是，某些支原體去除試劑可能會在去除支原體的過程中導致支原體膜溶解，從而釋放出支原體的DNA，這可能會在隨后的支原體核酸檢測中引起假陽性結果。因此，在去除支原體后，建議在繼續正常傳代培養幾代細胞后再進行支原體檢測，以確保檢測結果的準確性。

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標簽：免疫沉淀支原體

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