外泌體是指包含了復雜RNA和蛋白質的小膜泡(30-150nm)，現今，其特指直徑在40-100nm的盤狀囊泡。1983年，外泌體初次于綿羊網織紅細胞中被發現，1987年Johnstone將其命名為“exosome”。多種細胞在正常及病理狀態下均可分泌外泌體。其主要來源于細胞內溶酶體微粒內陷形成的多囊泡體，經多囊泡體外膜與細胞膜融合后釋放到胞外基質中。所有培養的細胞類型均可分泌外泌體，且外泌體天然存在于體液中，包括血液、唾液、尿液、腦脊液和乳汁中。有關他們分泌和攝取及其組成、“運載物”和相應功能的精確分子機制剛剛開始研究。外泌體目前被視為特異性分泌的膜泡，參與細胞間通訊，對外泌體的研究興趣日益增...

密度梯度離心法該方法由于比較繁瑣，用的較少。原理是：像所有的脂質小囊泡一樣，外泌體可以懸浮于特定密度梯度的蔗糖中，其密度范圍1.13g/ml-1.21g/ml，將要分離外泌體的樣本液體置于梯度蔗糖介質上，隨后通過離心將外泌體分離。此法獲得的外泌體純度較高，但步驟繁瑣，耗時，對離心時間極為敏感。具體步驟是：收集培養2d的上清液。將培養上清液先以1500r/min離心5min除去細胞及碎片,再依次以1000×g離心10min取上清,10000×g離心30min取上清,然后用100ku超濾離心管(Millipore)濃縮至15mL,用于外泌體提取的體液收集注意事項：抽血技巧。溫州正規外泌體提取試劑產...

外泌體相關miRNA與肺病的診斷：miRNAs是一類含有20～25個核苷酸的非編碼小RNA，能夠通過下調或壓制靶mRNAs來調節轉錄水平上的基因表達，目前非編碼RNA被普遍發現存在于NSCLC患者外泌體中，參與一些病癥的形成和演化過程。單個miRNA可能通過壓制性復合物與多個mRNA結合，從而阻滯整個生物通路。因此，外泌體的miRNA具有成為NSCLC標志物的優勢。Chen等在152例肺病患者的研究中初次報道了循環游離miRNA的表達，與75例健康者相比，發現了兩種高表達的miRNA（miR-25和miR-223）。Rabinonowits等對27例肺病患者和9例健康人的血漿外泌體中12個mi...

外泌體相關miRNA與肺病的診斷：miRNAs是一類含有20～25個核苷酸的非編碼小RNA，能夠通過下調或壓制靶mRNAs來調節轉錄水平上的基因表達，目前非編碼RNA被普遍發現存在于NSCLC患者外泌體中，參與一些病癥的形成和演化過程。單個miRNA可能通過壓制性復合物與多個mRNA結合，從而阻滯整個生物通路。因此，外泌體的miRNA具有成為NSCLC標志物的優勢。Chen等在152例肺病患者的研究中初次報道了循環游離miRNA的表達，與75例健康者相比，發現了兩種高表達的miRNA（miR-25和miR-223）。Rabinonowits等對27例肺病患者和9例健康人的血漿外泌體中12個mi...

外泌體與肺病預后：外泌體mirRNA和蛋白質被認為是NSCLC的預后因子。Dejima等在研究NSCLC患者預后的生物標志物時發現，外泌體miR-4257和miR-21的含量顯著上升。此外，還有研究表明，低水平miR-146a-5p的NSCLC患者較高水平miR-146a-5p的NSCLC患者有更高的復發率。Sandfeld-Paulsen等在研究276例NSCLC患者血漿的外泌體時發現，NY-ESO-1是其中對低生存率有顯著影響的標志物。Silva等利用TaqMan低密度芯片的方法系統分析了28位NSCLC患者體內的365種miRNA，其中let-7f、miR-30e-3p和miR-20b表...

外泌體的提取方法：1、磁珠免疫法。外泌體表面有其特異性標記物（如CD63、CD9蛋白），用包被抗標記物抗體的磁珠與外泌體囊泡孵育后結合，即可將外泌體吸附并分離出來。磁珠法具有特異性高、操作簡便、不影響外泌體形態完整等優點，但是效率低，外泌體生物活性易受pH和鹽濃度影響，不利于下游實驗，難以普遍普及。2、多聚物沉淀法。聚乙二醇（PEG）為常用的多聚物，可與疏水性蛋白和脂質分子結合共沉淀，早先應用于從血清等樣本中收集病毒，現在也被用來沉淀外泌體，其原理可能與競爭性結合游離水分子有關。利用PEG沉淀外泌體存在不少問題：比如純度和回收率低，雜蛋白較多（假陽性），顆粒大小不均一，產生難以去除的聚合物，機...

外泌體與肺病預后：外泌體mirRNA和蛋白質被認為是NSCLC的預后因子。Dejima等在研究NSCLC患者預后的生物標志物時發現，外泌體miR-4257和miR-21的含量顯著上升。此外，還有研究表明，低水平miR-146a-5p的NSCLC患者較高水平miR-146a-5p的NSCLC患者有更高的復發率。Sandfeld-Paulsen等在研究276例NSCLC患者血漿的外泌體時發現，NY-ESO-1是其中對低生存率有顯著影響的標志物。Silva等利用TaqMan低密度芯片的方法系統分析了28位NSCLC患者體內的365種miRNA，其中let-7f、miR-30e-3p和miR-20b表...

外泌體（Exosome）是細胞主動分泌的囊泡樣小體，大小均一，直徑30-200nm，密度1.10-1.18g/ml，來源普遍，幾乎所有細胞都可分泌，在血液，尿液，唾液，腦脊液，腹水，乳汁等體液中普遍分布。外泌體較早在1986年發現于培養的綿羊紅細胞上清液中。1996年，研究者發現外泌體作為抗原呈遞因子參與T細胞依賴的抗一些病癥反應，開啟了外泌體蛋白研究的新天地。2013年諾貝爾生物/醫學獎解答了細胞如何組織其內部較重要的運輸系統之一——囊泡傳輸系統的奧秘。超離法因操作簡單，獲得的囊泡數量較多而廣受?歡迎，但過程比較費時，且回收率不穩定，純度也受到質疑。同時對超速離心機的設備要求以及操作程序的培...

具體步驟是:以下所有步驟都在4℃下進行，1、300×g10min，棄沉淀，去除細胞2、2000×g20min，棄沉淀，去除死細胞3、10,000×g30min，棄沉淀，去除細胞碎片等亞細胞成分4、10,000×g70min，棄上清，沉淀即為外泌體5、PBS（每10ml細胞培養液用30mlPBS重懸）清洗沉淀物，混勻，10,000×g70min6、lmlPBS溶解沉淀（外泌體），立即使用或置于-80℃備用。7、一般超速離心法會結合密度梯度離心，這樣得到的外泌體更純，具體做法第4步后蔗糖梯度離心，10,000×g70min，以去除密度大于1.21g/ml的顆粒。優點是：成本低，操作簡單，獲得的囊泡...

外泌體與肺病預后：外泌體mirRNA和蛋白質被認為是NSCLC的預后因子。Dejima等在研究NSCLC患者預后的生物標志物時發現，外泌體miR-4257和miR-21的含量顯著上升。此外，還有研究表明，低水平miR-146a-5p的NSCLC患者較高水平miR-146a-5p的NSCLC患者有更高的復發率。Sandfeld-Paulsen等在研究276例NSCLC患者血漿的外泌體時發現，NY-ESO-1是其中對低生存率有顯著影響的標志物。Silva等利用TaqMan低密度芯片的方法系統分析了28位NSCLC患者體內的365種miRNA，其中let-7f、miR-30e-3p和miR-20b表...

有研究發現，NSCLC患者肺組織外泌體表面EGFR免疫染色呈陽性的占80%，而慢性肺炎組織的外泌體EGFR呈陽性的只占2%，因而認為外泌體的EGFR蛋白可以用作NSCLC與慢性肺炎鑒別診斷的生物標志物。Park等通過Sys-BodyFlu-id數據庫分析發現153種特異性胸腔積液外泌體蛋白質，進一步的Westernblotting分析顯示多種特異性胸腔積液外泌體蛋白參與EGFR信號傳導途徑以促進一些病癥的發生的發展，因此外泌體蛋白可能作為肺病診斷篩查的生物學標記物。外泌體相關蛋白質與肺病的診斷：近年來眾多文獻報道，肺病細胞分泌的外泌體中富含多種蛋白質并促進肺病的發生的發展，是早期診斷肺病的有效...

外泌體（exosome），特指直徑在40-100nm的盤狀囊泡。其主要來源于細胞內內溶酶體微粒內陷形成的多囊泡體，經多囊泡體外膜與細胞膜融合后釋放到胞外基質中。現已證實可以分泌外泌體的細胞有：肥大細胞、淋巴細胞、樹突狀細胞、瘤細胞、間充質干細胞等。外泌體在免疫中抗原呈遞、瘤的生長與遷移、組織損傷的修復等生理病理上起著重要的作用。同時，不同細胞分泌的外泌體具有不用的組成成分和功能，可作為疾病診斷的生物標志物。細胞外囊泡是蛋白質、mRNA、miRNA和脂質運輸來完成細胞間通訊通路的重要媒介，根據它們的大小和發生分為三類，包括外泌體、微泡和凋亡小體。其中，外泌體是直徑大約為40-100nm的包裝囊泡...

外泌體的提取、分離方法：梯度密度離心法。研究發現，外泌體的密度在1.1~1.19kg·L-1之間，因此，可以采用密度梯度離心法來分離外泌體。該方法是將超速離心結合蔗糖密度梯度或蔗糖墊結合，原理是先除去非囊泡物質，再通過梯度密度濃縮提取外泌體，該方法可以得到相對較為純凈的外泌體。傳統的梯度密度方法通常需要離心16h，但是2012年，研究者[15]使用了62~90h才分離出某些確切囊泡，因此，該方法可能不足以沉淀所有的外泌體。如果離心時間不充足，污染物質可能和外泌體保持在相同的密度層，特別是這個密度范圍又比較寬。由于外泌體是一個大小約幾十納米的囊狀小體，大于一般蛋白質。鄭州正規外泌體提取試劑廠家推...

外泌體因諾貝爾醫學獎而被眾人知曉，也因其作為生命信息傳遞者，在體液中普遍存在及易獲得性等特點被譽為液體活檢"新貴"，成為疾病的精確診斷和治病研究的熱點，尤其是在一些病癥研究領域[。外泌體作為細胞間通信載體的作用現在已被普遍接受。外泌體包含胞質環境中富含的DNA，RNA，蛋白質和其它分析物，研究表明，外泌體中的運轉RNA和蛋白質與一些病癥的生長密切相關，有望作為診斷標志物。研究發現Vps4A是一個外泌體的重要調控因子，與肝病的發生有著密切的關系，Vps4A基因的表達下調肝病的發生及轉移相關。通過microRNA高通量測序發現Vps4A基因能導致外泌體分泌肝病相關的重要microRNA，與肝病的發...

外泌體提取：尺寸排阻色譜。尺寸排阻色譜（Size-exclusionchromatography，SEC）是基于大小而非分子量實現分離大分子。該技術應用填充多孔聚合物微球的柱子，分子根據其直徑通過微球，半徑小的分子需要更長的時間才能通過色譜柱的孔隙遷移，而大分子則從色譜柱中更早地洗脫。尺寸排阻色譜可以精確分離大小分子。此外，可以將不同的洗脫溶液應用于該方法。與離心方法相比，色譜分離已被證明具有更多優勢，因為通過色譜分離的外泌體不受剪切力的影響，這可能會改變囊泡的結構。目前，SEC是一種普遍接受的分離血液和尿液中外泌體的技術。不過，該方法耗時較長，不適合大量樣本處理。這些試劑盒不需要特殊設備，隨...

外泌體與肺病預后：外泌體mirRNA和蛋白質被認為是NSCLC的預后因子。Dejima等在研究NSCLC患者預后的生物標志物時發現，外泌體miR-4257和miR-21的含量顯著上升。此外，還有研究表明，低水平miR-146a-5p的NSCLC患者較高水平miR-146a-5p的NSCLC患者有更高的復發率。Sandfeld-Paulsen等在研究276例NSCLC患者血漿的外泌體時發現，NY-ESO-1是其中對低生存率有顯著影響的標志物。Silva等利用TaqMan低密度芯片的方法系統分析了28位NSCLC患者體內的365種miRNA，其中let-7f、miR-30e-3p和miR-20b表...

外泌體與肺病預后：外泌體mirRNA和蛋白質被認為是NSCLC的預后因子。Dejima等在研究NSCLC患者預后的生物標志物時發現，外泌體miR-4257和miR-21的含量顯著上升。此外，還有研究表明，低水平miR-146a-5p的NSCLC患者較高水平miR-146a-5p的NSCLC患者有更高的復發率。Sandfeld-Paulsen等在研究276例NSCLC患者血漿的外泌體時發現，NY-ESO-1是其中對低生存率有顯著影響的標志物。Silva等利用TaqMan低密度芯片的方法系統分析了28位NSCLC患者體內的365種miRNA，其中let-7f、miR-30e-3p和miR-20b表...

由于這些核酸被囊膜包裹而被保護，穩定性高，不易降解，是一種用于一些病癥診斷和預后監測的非常理想的新型生物標記物一些疾病的早期診斷、用藥監控、預后判斷。近年來，隨著人們對外泌體的研究和認識加深，外泌體檢測作為一種新型的液體活檢熱點技術已被許多臨床科研機構普遍地應用于一些病癥和疾病的無創診斷、治病和監測；如何高效地提取外泌體是實現這項新興液體活檢技術臨床常規化應用的關鍵。外泌體(Exosome)是從體液(尿液、血液、唾液、腹水、胸腹水等)和細胞液中快速提取的，其是活細胞分泌到胞外的囊泡樣小體，含有多種蛋白和核酸分子(DNA、RNA、以及miRNA)，在體內細胞間物質和信號轉導中起到重要作用。外泌體...

外泌體的提取、分離方法：免疫親和層析法。免疫親和層析法是利用生物體內存在的抗原、抗體之間高度特異性的親和力進行分離的方法，主要用于生物大分子的分離、純化。將其應用于外泌體的分離主要是借助外泌體表面的特異性抗體，如TSG101或四跨膜蛋白。此方法的原理是利用抗原抗體的特異性結合，只有囊泡表面有特異性的抗體才可以被識別，這使得提取的外泌體純度高，但是產量低。Zarovni等分別用超速離心、密度梯度離心和免疫層析法，從血漿和細胞上清中提取外泌體蛋白，結果表明，免疫親和層析法得到的外泌體表面存在多種標記蛋白(Alix、CD9、CD63)，同時，ELISA和PCR結果也證明了該方法的可行性。外泌體提取：...

外泌體（Exosomes）是細胞分泌到胞外的一種囊泡（ExtracellularVesicles，EVs），其大小為30-150nm，具有雙層膜結構和茶托狀形態，含有豐富的內含物（包括核酸、蛋白和脂質等），參與細胞間的分子傳遞。外泌體普遍存在于細胞培養上清以及各種體液中，包括血液、唾液、尿液、乳汁等，同時也存在于組織樣本中，如腦組織、肌肉組織、脂肪組織等。腦組織分離方法簡述：將腦組織剪成薄片，放入離心管中加上消化液進行消化，經水浴、反復輕輕上下顛倒，再用移液間斷緩慢吹吸至消化結束。隨后加入培養基于消化液中，混勻，置于冰上。再進行一系列的差速超速離心過程，包括除雜、濾膜過濾、超離等。較后用PBS...

人體內多種細胞及體液均可分泌外泌體，包括內皮細胞、免疫細胞、血小板、平滑肌細胞等。當其由宿主細胞被分泌到受體細胞中時，外泌體可通過其攜帶的蛋白質、核酸、脂類等來調節受體細胞的生物學活性。外泌體介導的細胞間通訊主要通過以下三種方式：一是外泌體膜蛋白可以與靶細胞膜蛋白結合，進而靶細胞細胞內的信號通路。二是在細胞外基質中，外泌體膜蛋白可以被蛋白酶剪切，剪切的碎片可以作為配體與細胞膜上的受體結合，從而細胞內的信號通路。有報道稱一些外泌體膜上蛋白在其來源細胞膜上未能檢測出。外泌體提取色譜法是利用根據凝膠孔隙的孔徑大小與樣品分子尺寸的相對關系而對溶質進行分離的分析的方法。寧波正規外泌體提取試劑廠家推薦外泌...

外泌體研究思路。外泌體研究通常與高通量測序的聯系緊密，研究思路可以分為三大類：表達譜、分子標志物和分子機制方向，其中表達譜思路的特點就是短平快、通常以測序數據為主要內容，短平快發表3-5分文章。而分子標志物的特點是在表達譜基礎之上加入大量樣本驗證，建立ROC、KM曲線，分析分子與臨床疾病的相關性為主，通常文章影響因子在3-10分之間。分子機制研究，顧名思義要做到細胞功能、機制研究深度，因此工作量通常較大，影響因子通常能夠上10+。唐山正規外泌體提取試劑產品介紹在體內參與細胞通訊、細胞遷移、促血管新生和抗一些病癥免疫等生理過程，與多種疾病的發生和進程密切相關。外泌體提取：樣品中大分子不能進入凝膠...

外泌體的提取、分離方法：尺寸排阻色譜法和超濾法；尺寸排阻色譜法是利用分子篩理論，較初是根據蛋白質分子大小分離蛋白質的色譜技術。該方法的主要優點是不需要很大的離心力，從而保證了外泌體的完整性。Mol等[13]對比超高速離心和尺寸排阻色譜法得到的外泌體蛋白，結果顯示，后者得到的外泌體的蛋白豐度高于前者。這些基于過濾或尺寸排阻色譜的新方法為外泌體大規模的生產和臨床應用提供了可能。超濾也是根據外泌體的尺寸將其分離出來的一種方法，超濾一般被認為是外泌體分離過程中的一個準備過程，通過超濾除去大分子和小分子的蛋白質。不過連續的超濾可以分離出外泌體，和超高速離心相比，超濾不需要特殊的設備就可以較短時間內分離出...

外泌體的提取、分離方法：梯度密度離心法。研究發現，外泌體的密度在1.1~1.19kg·L-1之間，因此，可以采用密度梯度離心法來分離外泌體。該方法是將超速離心結合蔗糖密度梯度或蔗糖墊結合，原理是先除去非囊泡物質，再通過梯度密度濃縮提取外泌體，該方法可以得到相對較為純凈的外泌體。傳統的梯度密度方法通常需要離心16h，但是2012年，研究者[15]使用了62~90h才分離出某些確切囊泡，因此，該方法可能不足以沉淀所有的外泌體。如果離心時間不充足，污染物質可能和外泌體保持在相同的密度層，特別是這個密度范圍又比較寬。外泌體：形成了一種全新的細胞間信息傳遞系統，影響細胞的生理狀態并與多種疾病的發生與進程...

外泌體（exosome）是所有細胞釋放出的菌類大小的顆粒。它們天然地存在于血液中。根據來自美國德州大學MD安德森一些疾病中心的一項新的研究，對外泌體進行基因操縱可能提供一種新的胰腺病治病方法。論文通信作者為德州大學MD安德森一些疾病中心一些疾病生物學系研究員RaghuKalluri博士。在這項新的研究中，經過基因修飾的外泌體（被稱作iExosome）能夠運送特異性地靶向KRAS突變基因的小RNA分子，從而導致胰腺病模式小鼠病情緩解，增加它們的總存活率。這些研究人員采用了一種被稱作RNA干擾（RNAi）的靶向方法：利用這些天然的納米顆粒（即外泌體）運送小干擾RNA（siRNA）或短發夾RNA（s...

具體步驟是:以下所有步驟都在4℃下進行，1、300×g10min，棄沉淀，去除細胞2、2000×g20min，棄沉淀，去除死細胞3、10,000×g30min，棄沉淀，去除細胞碎片等亞細胞成分4、10,000×g70min，棄上清，沉淀即為外泌體5、PBS（每10ml細胞培養液用30mlPBS重懸）清洗沉淀物，混勻，10,000×g70min6、lmlPBS溶解沉淀（外泌體），立即使用或置于-80℃備用。7、一般超速離心法會結合密度梯度離心，這樣得到的外泌體更純，具體做法第4步后蔗糖梯度離心，10,000×g70min，以去除密度大于1.21g/ml的顆粒。優點是：成本低，操作簡單，獲得的囊泡...

外泌體與肺病預后：外泌體mirRNA和蛋白質被認為是NSCLC的預后因子。Dejima等在研究NSCLC患者預后的生物標志物時發現，外泌體miR-4257和miR-21的含量顯著上升。此外，還有研究表明，低水平miR-146a-5p的NSCLC患者較高水平miR-146a-5p的NSCLC患者有更高的復發率。Sandfeld-Paulsen等在研究276例NSCLC患者血漿的外泌體時發現，NY-ESO-1是其中對低生存率有顯著影響的標志物。Silva等利用TaqMan低密度芯片的方法系統分析了28位NSCLC患者體內的365種miRNA，其中let-7f、miR-30e-3p和miR-20b表...

外泌體(Exosome)是由細胞分泌而來的微小囊泡，直徑約為30-200nm，密度在1.13-1.21g/ml，具有杯狀形態、雙層膜結構，天然存在于血液、尿液、唾液、母乳和細胞培養基等生物體液中。包括瘤細胞在內幾乎所有類型的細胞（免疫細胞、神經細胞、干細胞)，都可以產生并釋放exosome。Exosome內含有與細胞來源相關的蛋白質rRNA和microRNA，Exosome可通過細胞膜受體直接受體細胞，也可運輸蛋白質、mRNA、miRNA、lncRNA、circRNA，甚至細胞器進入受體細胞，參與細胞間通訊。Exosome在免疫應答、炎癥反應、血管生成、凋亡、凝血和廢物處理等生理過程發揮關鍵作...

近年來，隨著外泌體研究的不斷深入，它的應用已經涉及一些病癥治病領域、醫學基礎和免疫領域、寄生蟲領域；臨床研究上已涉及心血管系統、內分泌代謝系統等。外泌體來源及內含物。幾乎所有類型的細胞都可以分泌外泌體，同時外泌體也普遍存在于體液中，包括血液、眼淚、尿液、唾液、乳汁、腹水等。目前研究發現外泌體中富含核酸（microRNA、lncRNA、circRNA、mRNA、tRNA等）、蛋白、膽固醇等。外泌體的表面marker主要有CD63、CD81、CD9、TSG101、HSP27等。外泌體鑒定。目前對于外泌體的鑒定主要有四種方法：透射電子顯微鏡（TEM）、Nanosight、WesternBlot、流式...

外泌體提取：1、過濾。超濾膜也可用于分離外泌體。根據外泌體的大小，從蛋白質和其他大分子中分離外泌體。較常見的過濾膜具有0.8μm、0.45μm或0.22μm的孔徑，可用于收集大于800nm、400nm或200nm的外泌體，也有設計成微柱多孔硅纖毛結構以分離40-100nm外泌體：不過，該方法由于過濾膜的粘附，可能會損失外泌體，并且過濾時的壓力和剪切力，可能會使外泌體變形受損。2、基于聚合物的沉淀技術。基于聚合物的沉淀技術通常包括將樣本與含聚合物的沉淀溶液混合，在4℃溫育并低速離心。用于聚合物沉淀的較常見聚合物之一是聚乙二醇（PEG）。用這種聚合物沉淀具有許多優點，包括對分離的外泌體影響小、pH...