1976年德國馬普生物物理化學研究所Neher和Sakmann在青蛙肌細胞上記錄記錄到AChjihuo的單通道離子電流1980年Sigworth等用負壓吸引，得到10-100GΩ的高阻封接（Giga-sea1），降低了記錄時的噪聲1981年Hamill和Neher等引進了膜片游離技術和全細胞記錄技術1983年10月，《Single-ChannelRecording》一書問世，奠定了膜片鉗技術的里程碑。膜片鉗技術原理膜片鉗技術是用玻璃微電極接觸細胞，形成吉歐姆（GΩ）阻抗，使得與電極前列開口處相接的細胞膜的膜片與周圍在電學上絕緣。滔博生物TOP-Bright專注基于多種離子通道靶點的化合物體外篩...

把膜電位鉗位電壓調到-80--100mV，再用鉗位放大器的控制鍵把全細胞瞬態(tài)充電電流調定至零位（EPC-10的控制鍵稱為C-slow和C-series;Axopatch200標為全細胞電容和系列電阻）。寫下細胞的電容值Cc和未補整的系列電阻值Rs，用于消除全細胞瞬態(tài)電流，計算鉗位的固定時間（即RsCc），然啟根據歐姆定律從測定脈沖電流的振幅算出細胞的電阻RC。緩慢調節(jié)Rs旋鈕注意測定脈沖反應的變化，逐漸增加補整的比例。如果RS補整非常接近振蕩的閾值，RS或Cc的微細變化都會達到震蕩的閾值，產生電壓的振蕩而使細胞受損。因此應當在RS補整水平寫不穩(wěn)定閾值之間留有10%-20%的余地為安全。準備資料...

膜片鉗技術的建立1.拋光及填充好玻璃管微電極，并將它固定在電極夾持器中。2.通過一個與電極夾持器連接的導管給微電極內一個壓力，一直到電極浸入記錄槽溶液中。3.當電極浸沒在溶液中時給電極一個測定脈沖（命令電壓，如5-10ms，10mV）讀出電流，按照歐姆定律計算電阻。4.通過膜片鉗放大器的控制鍵將微電極前列的連接電位（junctionpotentials）調至零位，這種電位差是由于電極內填充溶液與浸浴液不同離子成分的遷移造成的。5.用微操縱器將微電極前列在直視下靠近要記錄的細胞表面，并觀察電流的變化，直至阻抗達到1GΩ以上形成"干兆封接"6.調整靜息膜電位到期望的鉗位電壓的水平，使放大器從"搜尋...

電壓鉗的原理∶用兩根前列直徑0.5um的電極插入細胞內，一根電極用作記錄電極以記錄跨膜電位，用另一根電極作為電流注入電極，以固定膜電位。從而實現固定膜電位的同時記錄膜電流。電位記錄電極引導的膜電位（Vm）輸入電壓鉗放大器的負輸入端，而人為控制的指令電位（Vc）輸入正輸入端，放大器的正負輸入端子等電位，向正輸入端子施加指令電位（Vc）時，經過短路負端子可使膜片等電較，即Vm=Vc，從而達到電位鉗制的目的，并可維持一定的時間。Vc的不同變化將導致Vm的變化，從而引起細胞膜上電壓依賴性離子通道的開放，通道開放引起的離子流反過來又引起Vm的變化，致使Vm≠Vc，Vc與Vm的任何差值都會導致放大器有電壓...

膜片鉗技術本質上也屬于電壓鉗范疇，兩者的區(qū)別關鍵在于：①膜電位固定的方法不同；②電位固定的細胞膜面積不同，進而所研究的離子通道數目不同。電壓鉗技術主要是通過保持細胞跨膜電位不變，并迅速控制其數值，以觀察在不同膜電位條件下膜電流情況。因此只能用來研究整個細胞膜或一大塊細胞膜上所有離子通道活動。目前電壓鉗主要用于巨大細胞的全性能電流的研究，特別在分子克隆的卵母細胞表達電流的鑒定中發(fā)揮著其他技術不能替代的作用。該技術的主要缺陷是必須在細胞內插入兩個電極，對細胞損傷很大，在小細胞如元，就難以實現，又因細胞形態(tài)復雜，很難保持細胞膜各處生物特性的一致。滔博生物TOP-Bright專注基于多種離子通道靶點的...

資料分析：一般電學性質∶通過I/V關系計算得到單通道電導，觀察通道有無整流。通過離子選擇性、翻轉電位或其它通道的條件初步確定通道類型。通道動力學分析∶開放時間、開放概率、關閉時間、通道的時間依賴性失活、開放與關閉類型（簇狀猝發(fā)，Burst）樣開放與閃動樣短暫關閉（flickering），化學門控性通道的開、關速率常數等數據。藥理學研究∶研究的藥物，阻斷劑、激動劑或其它調制因素對通道活動的影響情況。綜合分析得出結淪。滔博生物TOP-Bright專注基于多種離子通道靶點的化合物體外篩選,服務于全球藥企的膜片鉗公司,快速獲得實驗結果,專業(yè)團隊,7*26小時隨時人工在線咨詢.膜片鉗，開啟細胞電生理研究...

膜片鉗技術的建立。拋光并填充玻璃管微電極，并將其固定在電極支架中。2.通過與電極支架連接的導管向微電極施加壓力，直到電極浸入記錄槽溶液中。3.當電極浸入溶液中時，給電極一個測量脈沖(命令電壓，如5-10ms，10mV)讀取電流，根據歐姆定律計算電阻。4.通過膜片鉗放大器的控制鍵將微電極前端的連接電位調至零。這種電勢差是由電極中的填充溶液和浸浴之間的不同離子成分的遷移引起的。5.用顯微操作器將微電極前緣靠近直視下待記錄的細胞表面，觀察電流的變化，直至阻抗達到1gω以上，形成“干封”6。將靜息膜電位調整到預期的鉗制電壓水平，這樣當細胞沒有鉗制到零時，放大器可以從“搜索”變?yōu)椤半妷恒Q制”。膜片鉗的膜...

在膜片鉗技術的發(fā)展過程中主要形成了五種記錄模式，即細胞貼附模式（cell-attachedmode或loose-seal-cellattachedmode）、膜內面向外模式（inside-outmode）、膜外面向外模式（outside-outmode）、常規(guī)全細胞模式（conventionalwhole-cellmode）和穿孔膜片模式（perforatedpatchmode）。a.亞細胞水平：細胞貼附模式，可記錄通過電極下膜片中通道蛋白的離子電流(紅色虛線箭頭)。在全細胞膜片鉗中，膜片破裂，因此可以記錄全細胞的宏觀電流，它表示整個細胞的總和電流(藍色虛線箭頭)。b.細胞水平：來自神經元不同...

這一設計模式似乎幾十年都沒有改變過，作為一個有著近20年膜片鉗經驗的科研工作者，記得自己進入實驗室次看到的放大器就差不多是這樣，也不覺得還會有什么變化。直到筆者在19年訪問歐洲的一個同樣做電生理的實驗室的時候，發(fā)現了這樣一款獨特的放大器，讓筆者眼前一亮，這款放大器從前置放大器出來的線竟然就直接連接在了電腦上，當筆者問他們放大器和數模呢？他們說，你看到的就是全部了，所以的部件都包含在了這個前置放大器中。滔博生物TOP-Bright專注基于多種離子通道靶點的化合物體外篩選,服務于全球藥企的膜片鉗公司,快速獲得實驗結果,專業(yè)團隊,7*63小時隨時人工在線咨詢.膜片鉗是一種用于夾持薄膜或其他薄片材料的...

80年代初發(fā)展起來的膜片鉗技術(patchclamptechnique)為了解生物膜離子單通道的門控動力學特征及通透性、選擇性膜信息提供了直接的手段。該技術的興起與應用，使人們不僅對生物體的電現象和其他生命現象更進一步的了解，而且對于疾病和藥物作用的認識也不斷的更新，同時還形成了許多病因學與藥理學方面的新觀點。膜片鉗技術是一種以記錄通過離子通道的離子電流來反映細胞膜單一的或多個的離子通道分子活動的技術。它和基因克隆技術（genecloning）并架齊驅，給生命科學研究帶來了巨大的前進動力。滔博生物TOP-Bright專注基于多種離子通道靶點的化合物體外篩選,服務于全球藥企的膜片鉗公司,快速獲得...

在心血管藥理研究中的應用，隨著膜片鉗技術在心血管方面的廣泛應用，對血管疾病和藥物作用的認識不僅得到了不斷更新，而且在其病因學與藥理學方面還形成了許多新的觀點。正如諾貝爾基金會在頒獎時所說：“Neher和Sadmann的貢獻有利于了解不同疾病機理，為研制新的更為的藥物開辟了道路”。目前在離子通道高通量篩選中主要是進行樣品量大、篩選速度占優(yōu)勢、信息量要求不太高的初級篩選。近幾年，分別形成了以膜片鉗和熒光探針為基礎的兩大主流技術市場。將電生理研究信息量大、靈敏度高等特點與自動化、微量化技術相結合，產生了自動化膜片鉗等一些新技術。滔博生物TOP-Bright專注基于多種離子通道靶點的化合物體外篩選,服...

膜片鉗技術的創(chuàng)立取代了電壓鉗技術，是細胞電生理研究的一個飛躍，使得離子通道的研究，從宏觀深入到微觀，使昔日的“肉湯生理學(brothphysiology)”與“閃電生理學(lightningphysiology)”在分子水平上結合起來，使人們對膜通道的認識耳目一新。當前，生理學、生物物理學、生物化學、分子生物學和藥理學等多種學科正在把膜片鉗技術和膜通道蛋白重組技術、同位素示蹤技術和光譜技術等非電生理技術結合起來，協(xié)同對離子通道進行較全的研究。不少實驗室已經將基因工程與膜片鉗技術結合起來，把通道蛋白有目的地重組于人工膜中進行研究。設想將合成的通道蛋白分子接種入機體以替換有缺陷和異常的通道的功能而...

膜片鉗技術的建立1.拋光及填充好玻璃管微電極，并將它固定在電極夾持器中。2.通過一個與電極夾持器連接的導管給微電極內一個壓力，一直到電極浸入記錄槽溶液中。3.當電極浸沒在溶液中時給電極一個測定脈沖（命令電壓，如5-10ms，10mV）讀出電流，按照歐姆定律計算電阻。4.通過膜片鉗放大器的控制鍵將微電極前列的連接電位（junctionpotentials）調至零位，這種電位差是由于電極內填充溶液與浸浴液不同離子成分的遷移造成的。5.用微操縱器將微電極前列在直視下靠近要記錄的細胞表面，并觀察電流的變化，直至阻抗達到1GΩ以上形成"干兆封接"6.調整靜息膜電位到期望的鉗位電壓的水平，使放大器從"搜尋...

膜片鉗的應用范圍：1.單離子通道(如鈉、鉀)的功能研究；2.心肌細胞離子通道研究（尤其與藥物作用相關的）；3.常規(guī)與病理的離子通道作用機制研究；4.單細胞的形態(tài)與功能關系的研究；5.心血管藥理學的研究；6.腦片膜片鉗（證實了腦組織在體外也能存活并保持很好的活性狀態(tài)，能使對腦細胞的研究更接近生理狀態(tài)下的情況，可檢驗不同腦區(qū)間的神經通路與功能鏈接）；7.神經環(huán)路的研究（光遺傳或化學遺傳病毒載體表達的驗證）；8.神經突觸可塑性的研究。由于膜片鉗檢測的是PA級的微電流信號，因此需要特殊的放大器及模數轉換器。美國多通道膜片鉗高阻抗封接不同的全自動膜片鉗技術所采用的原理如PopulationPatchCl...

膜片鉗技術是一種細胞內記錄技術，是研究離子通道活動的蕞佳工具，也是應用蕞很廣的電生理技術之一。該技術通過施加負壓將微玻管電極（膜片電極或膜片吸管）的前列與細胞膜緊密接觸，形成GΩ以上的阻抗，使電極開口處的細胞膜與其周圍膜在電學上絕緣。被孤立的小膜片面積為μm量級，內中只有少數離子通道。玻璃微電極中含有一根浸入電解溶液中的導線，用于傳導離子。在此基礎上對該膜片施行電壓鉗位（即保持跨膜電壓恒定），如果單個離子通道被包含在膜片內，則可對此膜片上的離子通道的電流進行監(jiān)測記錄。通過觀測單個通道開放和關閉的電流變化，可直接得到各種離子通道開放的電流幅值分布、開放幾率、開放壽命分布等功能參量，并分析它們與膜...

ePatch雖然設備非常小巧，但功能完備，傳統(tǒng)膜片鉗設備能做的實驗，用ePatch幾乎都能做。具有voltage-clamp，current-clamp，zerocurrent-clamp三種模式，自動電極電壓飄移補償，C-fast-C-slow-R-series-P/N補償，Bridgebalance補償等功能。可以做全細胞記錄也可以做單通道記錄，膜片鉗技術常做的離子通道電流，突觸后電流，動作電位檢測等實驗都能輕松實現。公司還為此開發(fā)了友好的控制和記錄軟件，筆者上手接觸了一下，發(fā)現跟AXON的軟件類似，并且程序編輯更為簡單易用。所記錄到的數據可以直接使用Clampfit進行分析，可以說對于使...

不同的全自動膜片鉗技術所采用的原理如PopulationPatchClamp技術∶同SealChip技術一樣，完全摒齊了玻璃電極，而是采用PatchPlate平面電極芯片。該芯片含有多個小室，每個小室中含有很多1-2μm的封接孔。在記錄時，每個小室中封接成功的細胞|數目較多，獲得的記錄是這些細胞通道電流的平均值。因此，不同小室其通道電流的一致性非常好，變異系數很小。美國Axon（MDS）公司采用這一技術研發(fā)出了全自動高通量的lonWorksQuattro系統(tǒng)，成為藥物初期篩選的金標準滔博生物TOP-Bright專注基于多種離子通道靶點的化合物體外篩選,服務于全球藥企的膜片鉗公司,快速獲得實驗結...

膜片鉗是一種用于研究生物膜電生理特性的技術，它能夠測量細胞膜通道和受體的電生理活動，以及藥物對它們的影響。膜片鉗技術的基本原理是將細胞膜的電生理活動轉化為微弱電流信號，然后通過放大器和記錄設備進行測量和記錄。在膜片鉗實驗中，細胞膜被固定在鉗制電極上，同時另一個電極用于刺激或記錄電信號。通過這種方式，可以測量細胞膜上各種通道和受體的電生理活動，例如鈉離子通道、鉀離子通道、氯離子通道、鈣離子通道等。膜片鉗技術具有高靈敏度和高分辨率的特點，可以檢測到非常微小的電流變化。此外，它還可以在單細胞水平上研究電生理活動，提供有關通道和受體功能和調節(jié)的詳細信息。因此，膜片鉗技術被廣泛應用于神經科學、心血管藥理...

電壓鉗技術是由科爾發(fā)明的，并在20世紀初由霍奇金和赫胥黎完善。其設計的主要目的是證明動作電位的產生機制，即動作電位的峰值電位是由于膜對鈉的通透性瞬間增加。但當時還沒有直接測量膜通透性的方法，所以用膜電導來測量離子通透性。膜電導測量的基礎是電學中的歐姆定律，如膜Na電導GNa與電化學驅動力(Em-ENa)的關系，膜電流INaGNa=INa/(Em-ENa)。因此，可以通過測量膜電流，然后利用歐姆定律來計算膜電導。然而，膜電導可以通過使用膜電流來計算。這個條件是通過電壓鉗技術實現的。下一張幻燈片中右邊的兩張圖顯示了squid的動作電位和動作電位過程中膜電流的變化，這是霍奇金和赫胥黎在半個世紀前用電...

把膜電位鉗位電壓調到-80--100mV，再用鉗位放大器的控制鍵把全細胞瞬態(tài)充電電流調定至零位（EPC-10的控制鍵稱為C-slow和C-series;Axopatch200標為全細胞電容和系列電阻）。寫下細胞的電容值Cc和未補整的系列電阻值Rs，用于消除全細胞瞬態(tài)電流，計算鉗位的固定時間（即RsCc），然啟根據歐姆定律從測定脈沖電流的振幅算出細胞的電阻RC。緩慢調節(jié)Rs旋鈕注意測定脈沖反應的變化，逐漸增加補整的比例。如果RS補整非常接近振蕩的閾值，RS或Cc的微細變化都會達到震蕩的閾值，產生電壓的振蕩而使細胞受損。因此應當在RS補整水平寫不穩(wěn)定閾值之間留有10%-20%的余地為安全。準備資料...

在形成高阻抗封接后，記錄實驗結果之前，通常要根據實驗的要求進行參數補償，以期獲得符合實際的結果。需要注意的是，應恰當設置放大器的帶寬，例如10kHz，這樣在電流監(jiān)測端將觀察不到超越此頻帶以外的無用信息。膜片鉗實驗難度大、技術要求高，要掌握有關技術和方法雖不是很困難的事，但要從一大批的實驗數據中，經過處理和分析，得出有意義、有價值的結果和結論，就顯得不那么容易，有許多需要注意和考慮的問題，包括減少噪音，避免電極前端的污染，提高封接成功率，具體實驗過程中還需要考慮如何選取記錄模式，為記錄特定離子電流如何選擇電極內、外液，如何選擇阻斷劑、激動劑，如何進行正確的數據采集等許多更為復雜的問題，還需在科研...

一、記錄設備首先，盡可能完善膜片鉗記錄設備是實驗前的重要步驟，如用模型細胞測定電子設備、安裝并測試應用軟件、調節(jié)光學顯微鏡、檢驗防震工作臺等。二、微電極的制備膜片鉗電極是用外徑為1-2mm的毛細玻璃管拉制成的。標準的毛細玻璃管（外經1.5mm，管壁厚0.3mm）適合于制作單通道記錄的微電極，而全細胞記錄則應選管壁較薄（0.16mm）的毛細玻璃管，這樣可以使電極阻抗較低。三、封接（Sealing）技術封接（seal）是膜片鉗記錄的關鍵步驟之一。封接不好噪聲太大必然影響細胞膜電信號的記錄，一般要求封接阻抗至少20GΩ才可進行常規(guī)記錄。為了形成良好封接必須保持清潔的溶液、良好的視野以及適當的電極鍍膜...

1937年，Hodgkin和Huxley在烏賊巨大神經軸突細胞內實現細胞內電記錄，獲1963年Nobel獎1946年，凌寧和Gerard創(chuàng)造拉制出前列直徑小于1μm的玻璃微電極，并記錄了骨骼肌的電活動。玻璃微電極的應用使的電生理研究進行了重命性的變化。Voltageclamp（電壓鉗技術）由Cole和Marmont發(fā)明，并很快由Hodgkin和Huxley完善，真正開始了定量研究，建立了H一H模型（膜離子學說），是近代興奮學說的基石。1948年，Katz利用細胞內微電極技術記錄到了終板電位;1969年，又證實N—M接觸后的Ach以"量子式"釋放，獲1976年Nobel獎。1976年，德國的Ne...

膜片鉗技術的建立。拋光并填充玻璃管微電極，并將其固定在電極支架中。2.通過與電極支架連接的導管向微電極施加壓力，直到電極浸入記錄槽溶液中。3.當電極浸入溶液中時，給電極一個測量脈沖(命令電壓，如5-10ms，10mV)讀取電流，根據歐姆定律計算電阻。4.通過膜片鉗放大器的控制鍵將微電極前端的連接電位調至零。這種電勢差是由電極中的填充溶液和浸浴之間的不同離子成分的遷移引起的。5.用顯微操作器將微電極前緣靠近直視下待記錄的細胞表面，觀察電流的變化，直至阻抗達到1gω以上，形成“干封”6。將靜息膜電位調整到預期的鉗制電壓水平，這樣當細胞沒有鉗制到零時，放大器可以從“搜索”變?yōu)椤半妷恒Q制”。膜片鉗是一...

ePatch雖然設備非常小巧，但功能完備，傳統(tǒng)膜片鉗設備能做的實驗，用ePatch幾乎都能做。具有voltage-clamp，current-clamp，zerocurrent-clamp三種模式，自動電極電壓飄移補償，C-fast-C-slow-R-series-P/N補償，Bridgebalance補償等功能。可以做全細胞記錄也可以做單通道記錄，膜片鉗技術常做的離子通道電流，突觸后電流，動作電位檢測等實驗都能輕松實現。公司還為此開發(fā)了友好的控制和記錄軟件，筆者上手接觸了一下，發(fā)現跟AXON的軟件類似，并且程序編輯更為簡單易用。所記錄到的數據可以直接使用Clampfit進行分析，可以說對于使...

全細胞膜片鉗記錄(Whole-cellpatch-clamprecording)是一種早期且使用頻繁的鉗夾技術，相當于連續(xù)單電極電壓鉗夾記錄，也就是說，全細胞記錄類似于傳統(tǒng)的細胞內記錄，但具有更大的優(yōu)勢，如分辨率高、噪聲低、穩(wěn)定性好、細胞內成分可控等。全細胞記錄技術測量一個細胞內所有通道的電流，記錄過程中電極的溶液代替原生質的成分。雖然膜片鉗記錄技術相對于原來的單電極電壓鉗有了很大的進步，尤其是在單離子通道鉗記錄中，細胞或腦片的組織選擇和實驗溶液的制備仍然是非常重要的步驟。膜片鉗技術，為您揭示細胞生命活動的細微變化！美國雙分子層膜片鉗單細胞膜片鉗技術:從一小片膜(約幾平方微米)上獲取電子信息的...

離子通道結構研究∶目前，絕大多數離子通道的一級結構得到了闡明但根本的還是要搞清楚各種離子通道的三維結構，在這方面，美國的二位科學家彼得阿格雷和羅德里克麥金農做出了一些開創(chuàng)性的工作，他們到用X光繞射方法得到了K離子通道的三維結構，二位因此獲得2003年諾貝系化學獎。有關離子通道結構不是本PPT的重點，可參考楊寶峰的和Hill的

膜片鉗技術（patchclamptechniques）是采用鉗制電壓或電流的方法對生物膜上離子通道的電活動進行記錄的微電極技術。1989年，Blanton將腦片電生理記錄與細胞的膜片鉗記錄結合起來，建立了腦片膜片鉗記錄技術（patchclamponinvitrobrainslices），這為在細胞水平研究反射中樞系統(tǒng)離子通道或受體在神經環(huán)路中的生理和藥理學作用及其機制提供了可能性。離體的腦組織能夠在一定的溫度、酸度和滲透壓、通氧狀態(tài)等條件下存活并保持良好的生理狀態(tài)。與急性分離的或培養(yǎng)的神經元相比，離體腦片中的神經元更接近生理狀態(tài)：基本保持了在體情況下的細胞形態(tài)，神經細胞之間及神經細胞與非神經細...

膜片鉗放大器的工作模式；(1)電壓鉗制模式:在鉗制細胞膜電位的基礎上改變膜電位，記錄離子通道電流的變化，如通道電流；EPSC；IPSC等電流信號它是膜片鉗的基本工作模式。(2)屯留鉗向細胞注入刺激電流，記錄膜電位對刺激電流的響應。記錄的是動作電位，EPSP；IPSP等電壓信號膜片鉗技術實現膜電位固定的關鍵是在玻璃微電極前沿與細胞膜之間形成高阻(10GΩ)密封，使與電極前開口相連的細胞膜與周圍環(huán)境電隔離，通過施加指令電壓來鉗制膜電位。探索離子通道的舞動，膜片鉗是您的科學利器！進口可升級膜片鉗高阻抗封接早在膜片鉗誕生之前，20世紀50~60年代，Hodgkin與Hexley便發(fā)現并使用了電壓鉗技術...

全細胞膜片鉗記錄（whole-cellpatch-clamprecording）是應用*早，也是*廣的鉗位技術，它相當于連續(xù)的單電極電壓鉗位記錄，也就是說全細胞記錄類似于傳統(tǒng)的細胞內記錄，但它具有更大的優(yōu)越性，如高分辨率、低噪聲、極好的穩(wěn)定性以及能控制細胞內的成分等。全細胞記錄技采測定的是一個細胞內全部**通道的電流，記錄過程中電極的溶液取代了原細胞質的成分。雖然膜片鉗記錄技術與*初的單電極電壓鉗位相比進步了很多，尤其在單離子通道鉗位記錄方面，細胞或腦片的組織選擇及實驗溶液的制備仍然是很重要的步驟。滔博生物TOP-Bright專注基于多種離子通道靶點的化合物體外篩選,服務于全球藥企的膜片鉗公司...