P21免疫抗體

zo-1的免疫熒光，步驟如下：1.細胞在蓋片上生長融合到95%-100%時，從孵箱中取出。2.用預溫的1×PBS洗3次，每次10分鐘。3.4%的甲醛室溫固定20-30分鐘。4.1×PBS洗3次，每次10分鐘。5.0.2%TritonX-100透化2-5分鐘。6.1×PBS洗3次，每次10分鐘。7.5%BSA室溫封閉30分鐘。8.加一抗（用1%BSA稀釋）放在濕盒里，4度過夜。9.1×PBS洗3次，每次10分鐘。10.加二抗(用1%BSA稀釋)30分鐘，閉光。11.1×PBS洗3次，每次10分鐘。12.95%甘油封片。注：4%甲醛，0.2%Triton，5%BSA均用1×PBS稀釋。免疫熒光技術可以用于研究植物病理學和農業生產。P21免疫抗體

熒光效率：熒光分子不會將全部吸收的光能都轉變成熒光，總或多或少地以其他形式釋放。熒光效率是指熒光分子將吸收的光能轉變成熒光的百分率，與發射熒光光量子的數值成正比。熒光效率＝發射熒光的光量分子數（熒光強度）／吸收光的光量子數（激發光強度）。發射熒光的光量子數亦即熒光強度，除受激發光強度影響外，也與激發光的波長有關。各個熒光分子有其特定的吸收光譜和發射光譜（熒光光譜），即在某一特定波長處有較大吸收峰和較大發射峰。選擇激發光波長量接近于熒光分子的較大吸收峰波長，且測定光波量接近于較大發射光波峰時，得到的熒光強度也較大。P21免疫抗體免疫熒光技術是一種利用熒光物質標記抗體來定位抗原的技術。

免疫熒光注意事項：對照實驗的設置：1、內源性組織背景對照：某些細胞和組織可能有固有的生物學性質，會產生背景熒光，對結果產生影響，例如色素脂褐質。因此在孵育一抗前，應對樣品進行觀察，確?？乖旧頉]有信號。2、陽性對照：用確認含有待測抗原的組織或細胞，與待測標本進行統一處理，結果應為陽性，可證明待測抗原有一定活性并且實驗過程中用的試劑及方法均可靠。3、陰性對照：與陽性對照相反，用明確不含有待測抗原的細胞或組織切片染色，結果若為陰性，可排除染色過程中由于非特異性染色造成的假陽性結果。

免疫熒光實驗的注意事項：為了保證熒光染色的正確性，初次試驗時需設置下述對照，以排除某些非特異性熒光染色的干擾。①標本自發熒光對照：標本加1-2滴0.01mol/L，pH7.4的PBS。②特異性對照（抑制試驗）：標本加未標記的特異性抗體，再加熒光標記的特異性抗體。③陽性對照：已知的陽性標本加熒光標記的特異性抗體。如果標本自發熒光對照和特異性對照呈無熒光或弱熒光，陽性對照和待檢標本呈強熒光，則為特異性陽性染色。一般標本在高壓汞燈下照射超過3min，就有熒光減弱現象，經熒光染色的標本較好在當天觀察，隨著時間的延長，熒光強度會逐漸下降。免疫熒光技術可以用于研究肉瘤的發生和發展過程。

細胞免疫熒光實驗注意事項：非特異性染色：是否滅活內源性過氧化物酶；孵育過程中干片；抗原熱修復過度。染色過深：一抗濃度過高；染色試濃度過高或孵育時間過長；染色劑濃度過高或孵育時間過長。通常實驗室先固定細胞再進行通透，但若檢測抗原是水不溶性蛋白，可先通透再固定，這樣可以通過通透去除一些水溶性蛋白，進而可降低免疫熒光背景和非特異性信號；建議設陰性對照組，消除由于抗體非特異性結合而產生的背景染色；選擇醛類固定液時，保持其新鮮度，較好現配現用，使用不新鮮的醛類固定液自發熒光背景會升高。免疫熒光是一種常用的生物學實驗技術，用于檢測和定位特定抗原或抗體。HBSAg免疫組化IHC

在1941年，Coons初次成功地使用熒光素作為標記物質進行免疫熒光實驗。P21免疫抗體

熒光標記二抗的選擇普遍；與使用熒光素結合一抗的檢測相比，成本較低。間接免疫熒光的缺點：由于需要具有兩種不同物種反應性的兩種抗體，因此物種交叉反應性問題增加；與直接免疫熒光相比，時間更長（操作步驟更多）。間接免疫熒光的優點：通過增加能夠與一抗結合的二抗數量進行信號放大；與直接免疫熒光相比，通過信號放大提高檢測靈敏度；熒光標記二抗的選擇普遍；與使用熒光素結合一抗的檢測相比，成本較低。間接免疫熒光的缺點：由于需要具有兩種不同物種反應性的兩種抗體，因此物種交叉反應性問題增加；與直接免疫熒光相比，時間更長（操作步驟更多）。P21免疫抗體

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