微滴式數字PCR系統在傳統的PCR擴增前對樣品進行微滴化處理,即將含有核酸分子的反應體系分成成千上萬個納升級的微滴,其中每個微滴或不含待檢核酸靶分子,或者含有一個至數個待檢核酸靶分子。經PCR擴增后,逐個對每個微滴進行檢測,有熒光信號的微滴判讀為1,沒有熒光信號的微滴判讀為0,根據泊松分布原理及陽性微滴的個數與比例即可得出靶分子的起始拷貝數或濃度。
與傳統PCR相比所具有的優勢
不依賴Ct值或內參基因,即可確定低至單拷貝的待檢靶分子的***數目。微滴技術讓數字PCR更低成本,且更實用。
雙通道熒光檢測,支持EvaGreen染料及探針法。上海JUE對定量數字PCR如何選型
研究方向
病原微生物的檢測(***、細菌等)
疾病預防控制中心、出入境檢驗檢疫局系統的實驗室目前主要采用基于TaqMan探針法的定量PCR體系對病原微生物進行核酸水平的檢測,而這些目前正在使用著的檢測體系可以無縫地轉移到QX200上,從而滿足該類實驗室對于檢測結果的要求:靈敏度更高、重復性更好、無需依賴標準曲線的***定量結果,同時操作簡便。
對于其他類型的研究實驗室,也可以利用ddPCR靈敏度高的特點,對各種樣品中的病原微生物展開***的研究。如HIV抗逆轉錄***治療過程中***殘留量的監控;HBV耐藥突變的檢測;HCV的分子分型;抗甲氧西林金黃色葡萄球菌的院內***監控;環境微生物不同功能基因之間的連鎖分析等等。 廣州廣州永諾數字PCR如何選型開放式平臺,支持用戶自行開發試劑、產品。
與常規PCR方法相比,數字PCR有如下優勢:
1、能夠***定量:常規PCR定量需要制定已知拷貝數的標準DNA曲線,但是由于待檢樣本與標準曲線不在統一體系,條件上會存在差異,另外加上PCR擴增效率的差異從而影響定量結果的準確性。而數字PCR不受標準曲線和擴增動力學影響,可進行***定量。
2、樣本需求量低:適用于珍貴樣本或核酸降解嚴重的樣本。
3、靈敏度高:數字PCR是將傳統PCR反應體系分割成數萬個**PCR反應,這些反應可以精確地檢測很小的目的片段差異、單拷貝甚至低濃度的混雜樣本。且能避免非同源異質雙鏈的形成。
4、高耐受性:由于目的序列被分配到多個**反應體系中,***降低了背景信號和***物對反應的干擾,擴增基質效應大大減小。
定量PCR和數字PCR的特點:
1. 在20多年的使用和發展中,定量PCR作為一種技術平臺,已經產出海量的數據,在工業界和分子檢測的某些應用上,定量PCR已經成為“金標準”。基礎研究方面,則形成了被稱為MIQE的“定量PCR標準實驗指南”。
2. 在定量PCR的各種應用中,基因表達分析(gene expression analysis)的應用比重約占七成,綜合各種因素來看,眼下定量PCR還是進行基因表達研究的理想手段。
3. 上述的“各種因素”具體展開,主要包括:通量、自動化程度、各種檢測探針與染料、檢測通道、成本和可參考文獻與protocol的數目等等。
4. 就目前市場上已有的數字PCR設備來看,定量PCR在檢測的線性范圍上具有優勢,意味著同一個run內可對各種表達豐度的樣品進行分析。
MicroDrop-100微滴式數字PCR 應用范圍如下:
a. 動植物檢驗檢疫,動物源性分析、極微量病原菌檢測定量分析、轉基因產品檢測;
b. 降低篩查成本、縮短檢測周期,適用于T13\T18\T21三體綜合征等遺傳病的風險評估;適用于zhong瘤早期篩查、分子分型、靶向用藥和療效監測等;適用于傳染性疾病的早期診斷和診療指導;
c. 可用于DNA甲基化的檢測、CRISPR-Cas9基因編輯效率檢測等。
d.基因表達差異監測單細胞研究:測序、PCR
e.無創產前篩查:低成本、快速、傳染性疾病:HBV、HIV、COVID-19 定量
2個光電倍增管(PMT),靈敏度及增益優于MPCC或CCD。廣州廣州永諾數字PCR如何選型
單細胞研究:測序、PCR。上海JUE對定量數字PCR如何選型
MiniDrop數字PCR儀由Creator微滴生成儀、Detector微滴檢測儀、MD Microchip微流控芯片及MD Plotter數據分析軟件組成,該系統的**為微流控微滴生成技術,采用原創性的油液,在40um微管道中利用氣壓驅動在2分鐘內生成50萬微滴,單次運行生成400萬微滴,微滴體積達皮升級,檢測線性范圍達到5個數量級,各項指標均超越國內外的主流產品。
MiniDrop創新性采用高壓驅動的方法將樣本分割成50萬份,打破了國外廠商在微滴式數字PCR領域的壟斷。 上海JUE對定量數字PCR如何選型
浚和(上海)儀器有限公司是一家供應國內外先進儀器和設備的專業供應商和服務商,致力于為客戶提供專業的定制化解決方案。多年來,持續為醫藥、化工、高校、科研單位、檢測院等多個行業提供先進的產品和專業的服務。
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公司主要經營產品包括:等離子清洗機、真空泵、噴霧干燥器、數字PCR、高壓滅菌鍋、培養箱、切片機、水分測定儀、激光粒度儀、光譜儀、溫濕度記錄儀等,目前主要合作品牌有:日本雅馬拓YAMATO、日本KASHIYAMA、日本HORIBA、廣州永諾 、日本KEM等。同時,公司還提供專業的技術服務,如設備的維護、驗證等。
浚和儀器將始終以行業特點為立足點,以客戶需求為導向,不斷地提高自身專業技術能力,不停地完善客戶服務質量,在發展中保持創新的精神,力求與客戶共同進步,為行業的發展作出不懈的努力。