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使用研磨儀、研磨棒或者使用超聲破碎細胞的方法破碎細胞,加入去污劑,如sds等,除去膜脂。去除細胞內的蛋白質,包括與DNA結合的組蛋白,通過加入蛋白酶,醋酸鹽沉淀,或者酚/氯仿抽提等方法去除。加入RNA酶去除RNA,如實驗不嚴密,可省略此步。沉淀DNA,需在冷乙醇或異丙醇中沉淀,放在冰箱-20℃沉淀30分鐘以上,原理是DNA在醇中不可溶而黏在一起發生沉淀。總結:DNA提取方法有下面⑦種一.酚抽提法:先用蛋酶K、SDS破碎細胞,消化蛋白,然后用酚和酚-氯DNA大小為100-150kb二.甲酰胺解聚法:破碎細胞同上,然后用高濃度甲酰胺解聚蛋白質與DNA的結合,再透析獲得DNA可得DNA200kb左右。三.玻璃棒纏繞法:用鹽酸胍裂解細胞,將裂解物鋪于乙醇上,然后用帶鉤或U型玻璃棒在界面輕攪,DNA沉淀液繞于玻棒。生成DNA約80kb。四.異丙醇沉淀法:基本同1法,*用二倍容積異丙醇替代乙醇,可去除小分子RNA(在異丙醇中可溶狀態)五.表面活性劑快速制備法:用TritonX-100A或NP40表面活性劑破碎細胞,然后用蛋白酶K或酚去除蛋白,乙醇沉淀或透析。六.加熱法快速制備:加熱96℃-100℃,五分鐘,然后離心后取上清,可用于PCR反應。七.堿變性快速制備:先用NaOH作用20分鐘,再加HCI中和。
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