南京TME多色免疫熒光

在多色免疫熒光技術中，不同顏色的熒光標記與不同分子或蛋白質的結合主要通過以下步驟實現：1.特異性抗體選擇：首先，根據實驗需要，選擇能夠特異性識別目標蛋白質或分子的抗體。這些抗體是高度特異性的，能夠與特定的抗原（即蛋白質或分子）發生結合。2.熒光標記物的偶聯：隨后，將不同顏色的熒光標記物（如熒光染料）偶聯到抗體上。這一過程確保每種抗體都被對應的熒光顏色標記，從而在后續的步驟中可以通過顏色來區分不同的抗體。3.抗體與抗原的結合：在樣本制備完成后，將標記了熒光染料的抗體添加到樣本中。這些抗體會與樣本中的特定蛋白質或分子（即抗原）發生特異性結合，形成抗原-抗體復合物。4.熒光信號的檢測：使用熒光顯微鏡觀察樣本。由于每種抗體都被標記了獨特的熒光顏色，因此可以通過熒光顯微鏡同時檢測和區分樣本中的多種不同蛋白質或分子。熒光信號的強度通常與抗原-抗體復合物的數量成正比，從而可以定量評估蛋白質或分子的表達水平。多色免疫熒光技術：同步揭示多種蛋白質在細胞內的分布。南京TME多色免疫熒光

多色免疫熒光的總體應用思路：多標技術：實現組織原位上多個靶標的標記，在染色 panel 中設置相應目標細胞的 marker；實現對多個細胞類群的識別和染色（各類淋巴細胞、髓系細胞、細胞因子等），對靶細胞的數量、空間分布、相互間位置關系等進行定量；實現對樣本Tumor微環境、Tumor異質性、Tumor免疫浸潤水平的描繪，結果可以應用于不同Tumor亞型 / 不同醫療方案 / 不同實驗因素干預的預后判斷 /醫療效果評價 / 免疫應答水平差異解析等場景，并可以聯合單細胞測序、空間轉錄組等組學實驗，對其檢測結果進行組織原位上的驗證和展示。常州TME多色免疫熒光掃描優化抗體偶聯熒光染料策略，以增強多色免疫熒光成像的信噪比和對比度。

在設計多色免疫熒光實驗方案以揭示細胞間多層次的相互作用和微環境特征時，應遵循以下步驟：1.明確目標：首先，明確實驗目標，即要檢測哪些生物標志物，以及這些標志物如何反映細胞間的相互作用和微環境特征。2.選擇合適的熒光染料：選用高質量的熒光染料，如Opal系列，能確保染料具有強而穩定的熒光信號，支持多色標記。3.樣本準備：對細胞或組織樣本進行適當處理，如切片脫蠟、抗原修復等，確保抗原的暴露和可檢測性。4.多色標記：通過多重免疫熒光技術，對目標生物標志物進行多色標記，確保每個標記物都能被準確識別和區分。5.成像與分析：使用多光譜掃描成像系統（如Vectra Polaris）進行成像，結合圖像分析軟件（如inForm）準確分離每個熒光染料的光譜特征，以及分離和去除組織自發熒光。6.質量控制：確保實驗過程中每個步驟的質量控制，如熒光信號的穩定性、圖像分析的準確性等，以保證結果的可靠性和可重復性。

多標染色技術是基于特殊的熒光染料 TSA（酪胺），以多輪單染的方式進行；每一輪染色按一抗 — 二抗 — TSA 的孵育順序對相應抗原進行標記；標記完成后將一抗和二抗在高溫和微波的修復條件下洗脫，TSA 保留（TSA 與抗原以共價鍵結合，抗原抗體以離子鍵結合，修復條件下離子鍵斷裂，共價鍵留存）；經過多輪這樣的準確標記與洗脫循環，不同的抗原可以被不同的熒光標記所標識，在單一的樣本上實現多目標的同時可視化，這對于理解復雜的細胞內環境、疾病進展機制以及藥物作用靶點的鑒定具有重要意義。從細胞骨架到細胞核，多色熒光有效解析細胞結構。

進行多色標記以揭示細胞間相互作用和微環境特征時，為平衡不同熒光通道之間的光毒性差異至關重要，要注意以下事項：1.選擇合適的熒光染料：優先選擇光穩定性好、光毒性低的熒光染料，以減少對樣本的損傷。2.優化激發光源：使用低強度、長波長的激發光源，減少對樣本的光照時間和強度，降低光毒性。3.減少激發波長重疊：盡量選擇激發波長差異較大的熒光染料，避免激發光在多個通道間重疊，降低不必要的曝光。4.采用順序掃描：使用序列掃描方法，即按順序激發不同熒光染料并分別采集熒光信號，以減少同時激發多個熒光染料時產生的光毒性。5.控制成像條件：在成像過程中，控制曝光時間、增益等參數，確保熒光信號的強度足夠且不會對樣本造成過度損傷。優化標記策略，平衡染料亮度與穩定性，對于長期追蹤實驗至關重要。江蘇病理多色免疫熒光TAS技術原理

高靈敏度探測器與高級光學濾鏡，助力捕捉弱熒光信號，提升圖像質量。南京TME多色免疫熒光

通過多色免疫熒光技術結合細胞微環境分析，可以深入探討Tumor細胞與其周圍基質細胞的相互作用機制，具體步驟如下：1.多色標記：利用多色免疫熒光技術，選擇特異性抗體標記Tumor細胞和基質細胞中的關鍵分子，實現不同組分的多色來區分。2.細胞微環境分析：對標記后的細胞進行成像，結合組織結構和細胞分布，分析Tumor細胞與基質細胞之間的相對位置和空間關系。3.分子互作檢測：觀察標記分子的共定位情況，結合熒光強度變化，評估Tumor細胞與基質細胞間可能存在的分子互作。4.定量與統計分析：利用圖像處理軟件對成像數據進行定量和統計分析，如細胞間距離、分子表達水平等，揭示Tumor細胞與基質細胞相互作用的程度和模式。南京TME多色免疫熒光