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重組蛋白的細菌表達系統(tǒng)有各種各樣的載體和宿主菌可供選擇,大部分工程菌的增殖時間短,不僅便于快速評價實驗結(jié)果,而且降低了技術(shù)和設(shè)備無菌要求的嚴(yán)格性。無害大腸桿菌是腸道正常微生物群的一部分與生物體為共生關(guān)系,可以通過產(chǎn)生維生素K 2使機體受益,并防止病原菌在腸道增殖。大腸桿菌是用于重組蛋白生產(chǎn)的宿主菌,它不僅具有遺傳背景清楚、培養(yǎng)操作簡單、轉(zhuǎn)化和轉(zhuǎn)導(dǎo)效率高、生長繁殖快、成本低廉,可以快速大規(guī)模地生產(chǎn)目的蛋白等優(yōu)點,而且其表達外源基因產(chǎn)物的水平遠高于其它基因表達系統(tǒng),表達的目的蛋白量甚至能超過細菌總蛋白量的30%,對小分子蛋白的生產(chǎn)具有極大的優(yōu)勢,因此大腸桿菌是目前應(yīng)用多的重組蛋白質(zhì)表達系統(tǒng)。重組蛋白藥物的發(fā)展動態(tài)。人TGF重組蛋白定制
為了保證重組蛋白良好的穩(wěn)定性和生物學(xué)活性,通常加8%(質(zhì)量比體積)的海藻糖和甘露醇作為凍干保護劑。海藻糖是一種以兩個葡萄糖分子通過 α,α,1,1-糖苷鍵連接的二糖。海藻糖是一種非還原糖,不與氨基酸或蛋白質(zhì)發(fā)生反應(yīng)。它本身不存在于哺乳動物體內(nèi),但哺乳動物體內(nèi)卻存在分解海藻糖的酶,且海藻糖作為一種小分子的半抗原,哺乳動物對其免疫反應(yīng)性很低。這使得海藻糖對live實驗或異種移植等實驗的干擾極小。海藻糖不僅可以防止蛋白在脫水狀態(tài)下改變其結(jié)構(gòu),更能在高溫、低溫、高滲透壓的條件下保留蛋白的生物學(xué)活性。目前,海藻糖以其高效的蛋白保護性能與相對低廉的價格漸漸代替 BSA,是免疫實驗產(chǎn)品和蛋白類產(chǎn)品添加劑的新寵。BMP-8重組蛋白R&D Systems是全球重組蛋白生產(chǎn)的前列。
重組人胰島素是上市的重組蛋白藥物,用于1型和2型糖尿病,經(jīng)過30多年的發(fā)展,目前胰島素已從一代動物源性胰島素發(fā)展到第四代長效胰島素類似物。目前重組蛋白藥物主要包含:1. 多肽類------重組人胰島素、胰島素類似物、重組人生長因子和重組人促卵泡成熟因子等。2. 細胞因子-----重組人促卵泡成熟因子、重組人干擾素α、β、γ、重組人粒細胞巨噬細胞刺激因子、重組人白細胞介素2、11、重組人表皮生長因子、重組人成纖維細胞生長因等。3. 重組酶----重組人尿激酶原、重組人α葡萄糖苷酶制劑等,以及其它如重組人骨形成蛋白2和重組水蛭素等多個細分領(lǐng)域。
重組蛋白疫苗是采用基因工程技術(shù),將病毒的目的抗原基因構(gòu)建在表達載體上,將已構(gòu)建的表達蛋白載體轉(zhuǎn)化到細菌、酵母或哺乳動物或昆蟲細胞中,在一定的誘導(dǎo)條件下,表達出大量的抗原蛋白,再經(jīng)提純并添加佐劑而制成疫苗。重組蛋白疫苗主要有三個優(yōu)勢:不養(yǎng)活病毒,無需擔(dān)心病毒外泄,對生產(chǎn)車間的生物安全等級要求低;利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)生產(chǎn)病毒S蛋白上的RBD蛋白,能實現(xiàn)高產(chǎn)量、高純度、低成本;重組蛋白疫苗只含RBD蛋白,純度高,安全性更好。高純度、高活性、低內(nèi)毒素,高批次間一致性是選購重組蛋白的重點。
重組蛋白的許多生產(chǎn)廠家都是不限制產(chǎn)品使用期限的,不規(guī)定重組蛋白和抗體產(chǎn)品的失效期或生產(chǎn)日期。在適當(dāng)?shù)拇鎯l件下,重組蛋白和抗體可以保持活性穩(wěn)定多年。這些條件包括以凍干粉形式存儲蛋白,以大于 0.1 mg/mL 的蛋白濃度存儲冷凍的產(chǎn)品(-20 °C 或 -80 °C)以及限制凍融循環(huán)的次數(shù)。但是,廠家常規(guī)質(zhì)量控制測試可確保所有產(chǎn)品在銷售時都具有可接受的生物活性。在實驗室的正常條件下使用時,我們保證產(chǎn)品達到或超過我們提供的技術(shù)參數(shù)。由于無法控制終端用戶的存儲條件,通常,保質(zhì)期為自購買之日起 6-12 個月。若有特殊要求,請參見各產(chǎn)品說明書。重組蛋白的表達與純化方法。無動物源性LIF重組蛋白定制
如何長期保存重組蛋白?人TGF重組蛋白定制
蛋白質(zhì)是基因功能的執(zhí)行者,蛋白間相互作用構(gòu)成機體生命活動的基礎(chǔ)。當(dāng)體內(nèi)行使特定功能的蛋白發(fā)生變異或濃度異常時,都會導(dǎo)致疾病的發(fā)生。因此,理論上蛋白類藥物可用于任何發(fā)病機制清楚、病理學(xué)靶點明確的疾病。蛋白質(zhì)藥物,特別是重組蛋白、工程化抗體等生物技術(shù)藥物取得的良好療效及巨大的經(jīng)濟效益。重組蛋白藥物主要有多肽類、細胞因子、血漿蛋白因子、重組酶及融合蛋白等類別。中國重組蛋白藥物市場以仿制藥為主,重組人胰島素、重組干擾素、重組粒細胞集落刺激因子為市場份額多的重組蛋白藥物,發(fā)展前景廣闊。人TGF重組蛋白定制
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