糖基化是指糖基轉(zhuǎn)移酶作用下將糖轉(zhuǎn)移至蛋白質(zhì)，和蛋白質(zhì)上的氨基酸殘基形成糖苷鍵。蛋白質(zhì)經(jīng)過糖基化作用，形成糖蛋白。糖基化是對(duì)蛋白的重要的修飾作用，有調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)，幫助蛋白質(zhì)折疊功能作用。在大多數(shù)情況下，生長因子或細(xì)胞因子的糖基化作用不會(huì)直接影響該蛋白與受體之間的結(jié)合。所以在體外研究中，重組生長因子或細(xì)胞因子的生物活性不會(huì)受糖基化作用的過多影響。不過，糖基化蛋白通常對(duì)蛋白酶的降解更不敏感具耐受性，所以在體內(nèi)的半衰期比未經(jīng)無糖基化的同種蛋白更長。因此在體內(nèi)研究中，以選擇哺乳動(dòng)物表達(dá)系統(tǒng)或昆蟲表達(dá)系統(tǒng)生產(chǎn)的重組蛋白可能是比大腸桿菌中生產(chǎn)的同種重組蛋白效果更好的一個(gè)選擇要好。普欣生物是國內(nèi)外多家著名生物試劑公司和臨床診斷公司的重組蛋白OEM供應(yīng)商。無動(dòng)物源性HGF重組蛋白定制
市場上重組蛋白通常以凍干形式售賣，這是因?yàn)榈鞍踪|(zhì)對(duì)熱敏感，凍干能使蛋白質(zhì)在存儲(chǔ)過程中保持活性,延長保存時(shí)間,同時(shí)也能降低運(yùn)輸成本。但是凍干對(duì)蛋白質(zhì)的活性會(huì)有一定的影響，可能造成蛋白質(zhì)部分失活、聚集和其它變性等。這個(gè)時(shí)候，就需要通過加入保護(hù)劑（穩(wěn)定劑，添加劑，輔料）和控制凍干的各種條件來盡可能降低這些負(fù)面的影響，盡可能的保護(hù)蛋白的活性。常見的保護(hù)劑或穩(wěn)定劑包括糖類，多元醇，聚合物，表面活性劑，某些蛋白和氨基酸等。無動(dòng)物源性HGF重組蛋白定制重組蛋白無論是保存還是運(yùn)輸，請(qǐng)避免反復(fù)凍融。
不同表達(dá)系統(tǒng)所生成的重組蛋白間有何主要區(qū)別？以賽默飛為例，Thermo Fisher Scientific? 所提供的重組蛋白產(chǎn)品通常在大腸桿菌，昆蟲細(xì)胞或哺乳動(dòng)物細(xì)胞等不同的表達(dá)系統(tǒng)中產(chǎn)生。不同表達(dá)系統(tǒng)之間產(chǎn)生的重組蛋白的主要差別在于這些蛋白所攜帶的翻譯后修飾，如糖基化修飾。在大腸桿菌中生成的重組蛋白未經(jīng)糖基化。在昆蟲細(xì)胞中產(chǎn)生的重組蛋白通常經(jīng)有部分糖基化，但不含半乳糖和唾液脫鹽酸，糖鏈也無復(fù)雜分支。在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中生成的重組蛋白會(huì)發(fā)生附帶完全的糖基化修飾。備注：Mimic? Sf9 昆蟲細(xì)胞（來源于sf9昆蟲細(xì)胞系，經(jīng)改造可穩(wěn)定表達(dá)多種哺乳動(dòng)物糖基轉(zhuǎn)移酶）可產(chǎn)生用于表達(dá)帶末端唾液酸和半乳糖的復(fù)雜的N-糖鏈。
近年來，用于重組蛋白表達(dá)和純化的技術(shù)和產(chǎn)品迅速增長。自從親和標(biāo)簽融合技術(shù)出現(xiàn)以來，多種多樣的短肽或蛋白親和標(biāo)簽極大地方便了外源表達(dá)重組蛋白的分離與蛋白質(zhì)復(fù)合體的純化，已成為蛋白質(zhì)研究領(lǐng)域不可或缺的工具。多聚組氨酸標(biāo)簽（His-tag）是目前高通量蛋白純化普遍使用的親和標(biāo)簽，His 標(biāo)簽融合蛋白的固定化金屬離子親和層析（immobilized metal-ion affinity chromatography, IMAC）被作為主要的蛋白純化方法。從重組蛋白的表達(dá)優(yōu)化，到小量誘導(dǎo)純化，再到中試、大規(guī)模生產(chǎn)需要眾多繁瑣、大量的工作。快速、可靠、高效的自動(dòng)化分離分析技術(shù)可極大地提高效率，降低時(shí)間、人員成本。重組蛋白疫苗有著天然的優(yōu)勢(shì)。
如果一個(gè)實(shí)驗(yàn)周期長于一周，或配制的細(xì)胞因子或重組蛋白一次用不完，我們就需對(duì)細(xì)胞因子或重組蛋白進(jìn)行長期保存。千萬不能將重組蛋白凍干粉用推薦的溶液重懸后直接分裝凍存于-20℃至-80℃。塑料管壁對(duì)多數(shù)蛋白均有很好的吸附作用，也就是說溶液中的蛋白很容易粘附在管壁。直接分裝凍存，則溶液中的大部分細(xì)胞因子或重組蛋白均會(huì)粘附到管壁上，導(dǎo)致溶液中實(shí)際溶解的細(xì)胞因子或重組蛋白的濃度大為降低，表現(xiàn)為細(xì)胞因子或重組蛋白活性的下降。正確的方法是：將已重懸的細(xì)胞因子或蛋白用含載體蛋白，如0.1% BSA(牛血清白蛋白)，10% FBS(胎牛血清)，5% HSA(人血清白蛋白)的溶液將重懸液進(jìn)一步稀釋，然后分裝凍存于-20℃至-80℃，即常規(guī)冰箱的冷凍室或超低溫冰箱中。國產(chǎn)重組蛋白種類多，性價(jià)比高。進(jìn)口重組蛋白銷售
重組蛋白與重組融合蛋白的區(qū)別。無動(dòng)物源性HGF重組蛋白定制
量化生產(chǎn)的重組蛋白種類有限，如果購買不到所需蛋白，則需要重組蛋白定制服務(wù)。對(duì)于特定的應(yīng)用，使用正確的蛋白表達(dá)系統(tǒng)是實(shí)驗(yàn)成功的因素。以義翹神州為例，義翹神州的重組蛋白表達(dá)服務(wù)，擁有多年的重組蛋白表達(dá)經(jīng)驗(yàn)，提供從基因合成、載體構(gòu)建到蛋白表達(dá)及純化的一站式服務(wù)。擁有多種重組蛋白表達(dá)系統(tǒng)，包括原核生物蛋白表達(dá)系統(tǒng)、酵母蛋白表達(dá)系統(tǒng)、昆蟲細(xì)胞蛋白表達(dá)系統(tǒng)（桿狀病毒）、哺乳動(dòng)物細(xì)胞蛋白表達(dá)系統(tǒng)。具備多種純化體系，為蛋白表達(dá)與純化方面提供多種選擇。自公司成立以來，已成功表達(dá)約6000 個(gè)毫克至克級(jí)的不同種屬的重組蛋白。每年1000個(gè)新蛋白的研制和生產(chǎn)能力以及快速解決研發(fā)和生產(chǎn)問題的能力。擁有近百個(gè)2L 到1000L 不同體積的發(fā)酵罐和超過30 種重組蛋白純化體系，可以滿足高通量及大規(guī)模的重組蛋白表達(dá)需求。無動(dòng)物源性HGF重組蛋白定制
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