干細胞外泌體提取試劑盒原理

在20世紀80年代，外泌體被描述為從網織紅細胞分泌的內體來源的囊泡。人們對這些細胞外囊泡的興趣逐漸增加，因為它們似乎參與了很多細胞過程。外泌體攜帶蛋白質、脂質和RNAs，介導體內不同細胞類型之間的細胞間通訊，從而影響正常和病理狀態。只有近，科學家才認識到將外泌體與其他類型的細胞外囊泡分開的困難，這排除了特定功能對不同類型分泌的囊泡的明確歸因。為了闡明這個復雜但正在發展的科學領域，該綜述著重于外泌體和其他分泌的細胞外囊泡的定義。討論了它們的生物發生，分泌及其后續的命運，因為它們的功能依賴于這些重要過程。外泌體復雜的內容物被認為是疾病診斷的無創或微創生物標志物。干細胞外泌體提取試劑盒原理

外泌體是各種細胞外泌的直徑在30-100nm之間的膜囊泡。因外泌體內含mRNA、microRNA等核酸和蛋白質對相鄰細胞具有交換信息的功能。作為細胞間信號傳導的通訊工具和作為病等各種疾病的生物標記話題比較熱門。近些年關于外泌體研究很普遍，但是關于外泌體相關的實驗技術，關于需要改進的課題存在很多。例如，外泌體提純方法中，超速離心法和聚合物沉淀法（市售試劑盒）混入多種雜質，給后續實驗產生了許多障礙。抗體親和法和密度梯度離心法，雖然可以提取到高純度的外泌體，但不能提取完整外泌體，無法分析外泌體具有的生理功能，也是兩種提取方法的問題所在。而免疫印跡法（WB）和Elisa檢測法作為被普遍應用的外泌體檢測的一般方法，又存在檢測時需使用大量外泌體和難以檢測到低表達水平的標記蛋白。細胞外囊泡與外泌體區別外泌體是細胞在特定條件下分泌的小囊泡，是細胞間傳遞信號，相互溝通和影響的重要工具。

外泌體作為細胞外囊泡的一個亞群,直徑集中于30~150nm。目前,基于粒徑大小分離外泌體的方法有超濾法、尺寸排除色譜法、靜水過濾透析法和非對稱場流分離法等。超濾法利用不同孔徑的濾膜,對樣品進行選擇性分離以獲得外泌體,一般分為壓力超濾和離心超濾。其中離心超濾效果更好,不jin能減輕力對外泌體的破壞,而且可通過增大離心力和延長離心時間提高外泌體產物濃度。但離心力過大或離心時間過長均有可能導致超濾膜或外泌體破裂。此外,超濾法可以和切向流過濾法、微控流法、超速離心法或凝膠過濾色譜法等方法結合進一步提高分離效率。

外泌體的形成始于細胞內陷，成熟于多囊泡胞內體，終于膜融合。細胞通過內吞作用產生小囊泡，小囊泡融合形成早期胞內體（earlyendosome），在多個蛋白的協同調控下，早期胞內體出芽形成含有多個腔內小囊泡的多泡體（multivesicularbodies，MVB），這個過程中這些腔內小囊泡（intraluminalvesicles，ILVs）會裝載各種核酸和蛋白質等分子，泡內體較后在GTPase家族中RAB酶的調節下與細胞膜融合。隨后，這些小囊泡會被釋放到細胞外，稱為外泌體。外泌體是通過細胞內吞細胞膜融合主動排除的物質，大小均勻，而微泡是由細胞直接出芽脫落生成，大小不均一。外泌體給后續實驗產生了許多障礙。

Exosome（外泌體）是由活細胞分泌小囊泡，具有典型的脂質雙分子層結構；參與細胞之間的交流，物質的運輸以及正常生理過程的維持，此外還與疾病的產生有關。對分離的外泌體進行體外標記或示蹤，有助于對外泌體的功能進行進一步的研究。目前對于外泌體的標記方法有很多種，包括親脂性的染料和膜滲透型的化合物等。PKH67的體內熒光半衰期為10-12天。相比于PKH-67，PKH-26具有更長的半衰期，標記在兔紅細胞上的PKH26半衰期長達100天以上。特別適用于體外增殖研究以及長期的體內細胞跟蹤研究。外泌體是各種細胞外泌的直徑在30-100nm之間的膜囊泡。湖北外泌體iTRAQ

神經細胞來源的外泌體含有與神經退行性疾病相關的分子。干細胞外泌體提取試劑盒原理

外泌體是細胞間信息傳遞的重要“信使”,可通過三種方式介導細胞通訊:(1)外泌體以旁分泌的方式與靶細胞相互作用,通過受體–配體作用黏附到靶細胞表面,隨后被內吞入靶細胞,或直接將內容物釋放到靶細胞內,從而激huo靶細胞;(2)外泌體的胞外膜蛋白可以被蛋白酶切割,產生的片段可以與靶細胞的細胞表面受體結合,從而激huo靶細胞;(3)外泌體還可以與靶細胞直接接觸發生膜融合,導致外泌體中的蛋白和核酸非選擇性轉移到目標細胞,從而引起靶細胞的響應。通過介導細胞間的通訊,外泌體不jin能夠參與多種生理過程,比如消除胞內陳舊分子、呈遞抗原、分化調節性T淋巴細胞或髓樣細胞以抑制免疫反應,而且還可以參與疾病形成的病理過程,如通過與受體細胞的相互作用傳播病原物質、促進中流轉移過程中的血管生長和中流細胞遷移。干細胞外泌體提取試劑盒原理