透射電子顯微鏡(TEM)和掃描電子顯微鏡(SEM)是用于評估外泌體形態、大小和表型的的兩種常見的電子顯微鏡。SEM和TEM均使用電子束產生高分辨率的亞微米顆粒放大圖像,以區分外泌體與殘留在樣品中相似大小的非外泌體顆粒,該方法還可用于檢查樣品的純度。TEM與SEM之間的區別在于檢測電子類別,在SEM中,電子與樣品中的粒子相互作用時會發生散射,捕獲并檢測散射的電子,從而生成粒子圖像。但是,在TEM中,不與粒子相互作用的電子穿過樣品,并使用熒光屏進行檢測。電子顯微鏡下外泌體大小不一,通常呈茶托樣的圓形或橢圓形。采用電子顯微鏡檢測外泌體時對樣品的預處理和制備要求較高,外泌體的提取方法和品質會對電鏡結果造成影響;另外樣品的準備階段比較復雜,不適合進行大量快速的測量;而且由于樣本經過了干燥、固定以及冷凍等預處理和制備過程,對生物樣本的結構會造成一定的破壞,從而影響觀察的效果,無法準確測量外泌體濃度。安徽植物外泌體鑒定磁珠免疫法分離的外泌體,生物活性易受pH和鹽濃度影響,不利于下游實驗,難以普遍普及。外泌體膜可以與靶細胞膜直接融合,非選擇性的釋放其所含的蛋白質、mRNA以及microRNA。植物外泌體提取試劑盒價格
外泌體是細胞分泌到胞外的一種囊泡,其大小為30-150nm,具有雙層膜結構和茶托狀形態,含有豐富的內含物(包括核酸、蛋白和脂質等),參與細胞間的分子傳遞。外泌體普遍存在于細胞培養上清以及各種體液中,包括血液、唾液、尿液、乳汁等,同時也存在于組織樣本中,如腦組織、肌肉組織、脂肪組織等。所有的細胞都能分泌外泌體,但是不同細胞分泌的外泌體不管在數量上還是在內含物中都具有比較大的差異性,這也決定了每種外泌體所行使的功能不一樣。外泌體普遍參與細胞間物質運輸與信息傳遞,調控細胞生理活動。同時,外泌體具有抗原提呈、免疫逃逸、誘導正常細胞轉化、促進瘤子發生和轉移等作用;此外,外泌體還可以作為“天然的納米粒子”來進行藥物遞送。外泌體的膜蛋白有可能與細胞膜蛋白作用,活躍細胞內通路。外泌體二型膠原蛋白填充外泌體提取在短時間(一周之內)使用,可以放在4度保存,如果長時間保存可以放在-20度或-80度保存。
外泌體研究背景:胞外囊泡是從細胞膜上脫落或者由細胞分泌的具有雙層膜結構的囊泡狀小體,主要由微囊泡、凋亡小體、外泌體組成。而外泌體是其中一類小囊泡,直徑為30~150nm,密度1.10~1.18g/ml,可攜帶核酸、蛋白質質和脂質等,存在于血液、唾液、尿液等多種體液中。越來越多的研究證實,外泌體可以通過細胞間轉移核酸、蛋白質、脂質等特定物質,發揮特殊的功能。如在抗原提呈細胞中呈遞抗原程中、腫細胞細胞發生了發展、神經細胞信號轉導過程中都發揮著重要作用。對外泌體的分析和檢測可以輔助疾病的早期診斷、療效評價和預后分析。
為什么超速離心提取外泌體看不到沉淀?答:這種問題通常有三種可能性,其一:使用的細胞上清或者血清量太低,從而造成了這樣的結果。其二:使用了不透明的超速離心管,一般來說外泌體產量都比較小,所以凡是不透明的管子,基本都是比較難見到明顯沉淀的,可以當做有沉淀,然后操作下去即可。其三:使用了角轉。部分品牌離心機的角轉管壁粘附性比較低,超離結束沒多久沉淀就會滑落下去,所以請在離心結束時趕緊去收樣。外泌體的角色:1、外泌體發揮功能并一定需要受體細胞攝入外泌體:外泌體的膜蛋白有可能與細胞膜蛋白作用,活躍細胞內通路。2、外泌體的角色之一:細胞-細胞通訊,比如抗原遞呈。外泌體存在于組織樣本中,如腦組織、肌肉組織、脂肪組織等。
全轉錄組測序的研究對象為特定細胞在某一功能狀態下所能轉錄出來的所有RNA,主要為mRNA和lncRNA、circRNA等非編碼RNA。外泌體中攜帶有來自母本細胞的多種蛋白質、脂類、短鏈RNA和長鏈RNA等重要信息。對外泌體中的長鏈RNA進行全轉錄組測序及分析,不只能夠篩選外泌體攜帶的特異Biomarker,同時對深入了解疾病或不同發育階段的內在機制也有重要意義。外泌體全轉錄組測序體系,充分結合了微量核酸建庫技術、NGS技術和全新的生物信息序列比對算法,可實現對1mL血漿中的外泌體即可進行mRNA、lncRNA和circRNA等RNAs充分測序,獲取周全的外泌體轉錄組信息。外泌體的提取的方式:密度梯度離心法。植物外泌體提取試劑盒價格
外泌體的膜同細胞一樣,是磷脂雙分子層。植物外泌體提取試劑盒價格
外泌體攜帶大量特異性的蛋白質(如細胞因子、生長因子)以及功能性的mRNAs、miRNAs等生物活性物質,在體內參與細胞通訊、細胞遷移、促血管新生和抗瘤子免疫等生理過程,與多種疾病的發生和進程密切相關。由于外泌體的特殊結構和功能,使得它具有潛在的應用價值,一方面可以作為診斷多種疾病的生物指標,另一方面也可以作為診療手段,未來有可能作為藥物的天然載體用于臨床診療。外泌體研究,應選用血漿還是血清?答:血清是血液凝固之后收集的液體,所以其中少了纖維蛋白原,凝血因子,以及多了比較多凝血產物。纖維蛋白原可轉化為纖維蛋白,具有凝血功能。在凝血過程中血小板會分泌大量的外泌體,有研究發現血清中有接近50%的外泌體來自額外的分泌。植物外泌體提取試劑盒價格
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